听说你们家干细胞技术很厉害,帮我指导成骨诱导分化啊
MSCs可以从人或小鼠的各种组织中分离出来。这一小群细胞可以在体外连续传代后分离、扩增和富集。它可以被诱导分化为软骨、骨骼、肌腱、韧带和脂肪等细胞(图1)。
图1. MSCs来源、鉴定标志物和诱导分化方向【1】
在大多数干细胞实验研究中,诱导分化成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞已经成为鉴定其分化潜能的金标准。说到这儿,科研人的DNA又动了,如何提高诱导分化实验成功率?(点这里复习常见的“疑难杂症”详解)。接下来,我们带大家一一破局三系分化实验,本期是成骨诱导分化。
成骨诱导分化
体外诱导成骨分化的鉴定主要是通过检测成骨细胞的生物学标志以及相关的标志基因来进行的。短期的成骨分化可通过碱性磷酸酶来检测,长期的成骨分化则通过检测茜红素染色骨结节来鉴定。
耕耘干细胞领域十五载,赛业OriCell®提供的干细胞及相关培养基已服务数万客户,相关干细胞技术服务如定向诱导分化、原代细胞提取与鉴定等赛起来也是当仁不让(让我叉腰得瑟会儿)。先来两组美图展示,更多案例欢迎咨询。
实操走起
01 所需材料
✅ OriCell®间充质干细胞成骨诱导分化试剂盒(套装内含基础培养基、优级胎牛血清、成骨诱导添加物、茜素红染色液、明胶)
✅ OriCell®Phosphate-Buffered Saline (1×PBS) (货号:PBS-10001)
✅ 4%多聚甲醛溶液或10%福尔马林溶液
02 实验操作步骤
❶ 加1mL 0.1%明胶到六孔板中,摇匀,使其能均匀覆盖各孔底面。
❷ 将铺有0.1%明胶的六孔板放置在超净台或CO2培养箱至少30min。
❸ 30min后吸去明胶即可用于接种细胞,或等待六孔板晾干再接种。
❹ 将待诱导的间充质干细胞按照 2×104 cells/cm2的细胞密度接种于六孔板中,每孔加入2mL普通完全培养基。
❺ 细胞置于37℃、5%CO2、饱和湿度的CO2培养箱中培养。
❻ 当细胞融合度达到 70%时,小心地将孔内完全培养基吸走,向六孔板中加入2mL OriCell®间充质干细胞成骨诱导分化培养基。
❼ 每隔3天,换用新鲜的OriCell®间充质干细胞成骨诱导分化培养基。
❽ 诱导2~4周后,视细胞的形态变化及生长情况,用茜素红进行染色。
03 茜素红染色
❶ 成骨诱导分化结束后,吸去六孔板中的成骨诱导分化完全培养基,用1×PBS轻柔洗涤2~3次。
❷ 每孔加入2mL 4%多聚甲醛溶液(或10%福尔马林),室温固定30min。
❸ 吸去固定液,用1×PBS轻柔洗涤2~3次,确保将固定液清洗彻底。
❹ 每孔加入2mL茜素红工作液,室温染色5~10 min。
❺ 吸去茜素红染色液,用1×PBS轻柔洗涤2~3 次,充分洗去多余染色液。
❻ 每孔加入2mL 1×PBS,将培养板置于显微镜下观察成骨染色效果。
❼ 染色后的六孔板用封口膜封装后,置于4℃可保存2周。
注意事项
● 请按照OriCell®试剂盒套装内各成分比例,配制所需量;但剩余的成分必须严格按照各自的保存条件妥善保存,并且不可多次冻融;
● 为防止成骨细胞脱落、钙结节损失,建议成骨过程中出现明显钙结节之后,每两天半量换培养液一次;
● 为防止钙结节脱落,所有操作尽可能轻缓;
● 茜素红使用前请恢复至室温;如果染色效果较差,可适当延长染色时间;
● 请确认出现钙结节后再进行染色。
赛业OriCell®干细胞诱导分化
依赖于成熟的干细胞技术平台,我们可以为您开展多种干细胞分化潜能研究的实验服务。其中针对特定种属优化定制的诱导分化试剂盒,可向成骨、成脂、成软骨、成肝等多个方向诱导,性能稳定,诱导分化效果好!同时,我们可以按照您提供的诱导试剂和诱导方法为您完成特定的干细胞诱导实验,也可以按照您的目的和要求,在各种干细胞诱导途径中为您探索出一套相对完善的方法。
图片来源:
1. Fate decision of mesenchymal stem cells: adipocytes or osteoblasts?.Cell Death and Differentiation (2016) 23, 1128–1139; doi:10.1038/cdd.2015.168; published online 12 February 2016.
填写需求描述给我们
工具快速咨询
400-680-8038
info@oricellbio.cn