稳转细胞株
稳转细胞株被广泛应用于基因功能研究、小鼠疾病模型建立、小分子药物和抗体药开发等场景。赛业建立了一套成熟稳定的基因干扰和过表达的实验体系，针对多种不同细胞（包括难转染细胞），均可提供稳转细胞株的构建服务。
服务内容
- 基因编辑细胞株
| 服务项目 | 服务内容 | 交付标准 | 周期 |
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过表达 稳转株 |
组成型（慢病毒法） |
稳转cell pool，2管（106细胞/管） 1个单克隆，2管（106细胞/管） 对照cell pool，2管（106细胞/管） 实验报告（含实验基本流程、载体报告、 引物序列、稳转株鉴定结果等信息） |
Cell pool：8周起； 单克隆：12周起 |
| 诱导型（慢病毒法） | |||
| 组成型（PB法） | |||
| 诱导型（PB法） | |||
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干扰 稳转株 |
组成型干扰 |
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| 诱导型干扰 |
- 体外检测
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服务项目 |
服务内容 |
交付标准 |
周期 |
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DNA检测 |
PCR和测序 |
实验报告（含实验基本流程、检测结果和结论等信息） |
1周起 |
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mRNA检测 |
qPCR |
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蛋白检测 |
Western blot、流式（三激光十三色流式细胞仪）、 IF、ELISA |
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功能检测 |
Luciferase assay、cAMP、钙流、细胞增殖、 凋亡、周期、迁移/侵袭等 |
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IPSC服务 相关检测 |
STR鉴定、免疫荧光、流式、核型分析、 体外三胚层分化、畸胎瘤等 |
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细胞治疗服务 相关检测 |
免疫细胞表型检测、CAR-T/NK细胞增殖服务、 CAR-T/NK细胞杀伤服务、CAR-巨噬细胞吞噬实验服务、 细胞因子检测服务、抗体药ADCC和ADPC服务 |
实验流程与周期示意图
服务优势
- 丰富的成功经验
超千例项目成功案例，超250种靶细胞经验，客户多篇文献引用发表。
- 多种转染或感染方式
慢病毒、PB转座子等多种策略。
- 高调控效率和性状稳定
可实现几十、百倍的过表达水平，经过十几代甚至更高的细胞传代后，仍然维持稳定的过表达性状。
- 丰富多样的体外检测
提供从基因、mRNA、蛋白到功能等全套体外检测服务。
- 严格的质控体系
双重检测细菌、支原体等微生物，100%确保无污染；进行细胞活率检测，保证交付质量。
- 细胞到动物的整体服务方案
提供从细胞基因表达调控、细胞功能验证、小鼠疾病模型建立到表型分析的全套服务。
服务案例
- 肿瘤模型细胞株构建
图1. MCF-7/luciferase细胞构建和鉴定结果。（A . Luciferase assay结果：luciferase高表达1000倍以上，显示成功构建MCF-7/luciferase细胞株；B. MCF-7/luc细胞株接种小鼠体内成像：显示MCF-7/luciferase细胞株可以在体内成瘤；C. 取骨后荧光成像：显示成功构建乳腺癌骨转移模型。）
- 抗原表达稳转细胞株构建
图2. K562稳转细胞株构建流式结果。K562过表达细胞株相比于对照细胞有一个log shift的位移，且阳性率为99.86%，表明成功构建K562过表达稳转株。
- 诱导型过表达细胞株构建
图3. 基因A诱导型过表达细胞构建和鉴定结果。基因 A过表达细胞株在DOX诱导下，相比于对照细胞有10倍以上表达，表明成功构建基因 A诱导型过表达株。
- 体外药效评价服务
图4. CD19 CAR-T细胞体外药效评价实验检测结构。A. CD19 CAR分子结构图示；B. CD19 CAR-T细胞阳性率检测结果；C. Nalm6细胞CD19抗原阳性率检测结果；D. CD19 CAR -T杀伤Nalm6细胞实验统计结果，显示CD19 CAR-T细胞对Nalm6细胞具有显著增强的杀伤作用；E. 杀伤实验上清中IFN-γ含量检测结果， 显示同Nalm6细胞共孵育后CD19 CAR-T细胞的IFN-γ分泌能力均显著增强。
成功基因编辑细胞类型精选
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分类 |
细胞名称 |
缩写 |
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血液和淋巴系统 |
小鼠单核巨噬细胞白血病细胞 |
RAW 264.7 |
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人B淋巴母细胞 |
HMy2.CIR |
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人T淋巴细胞白血病细胞 |
HuT 78 |
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人单核细胞白血病 |
THP-1 |
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人慢性髓系白血病细胞 |
K-562 |
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人原髓细胞白血病细胞 |
HL-60 |
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人白血病T淋巴细胞 |
Jurkat, Clone E6-1 |
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骨骼、皮肤系统 |
小鼠黑色素瘤细胞 |
B16 |
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小鼠皮肤黑色素瘤细胞 |
B16-F10 |
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人骨肉瘤细胞 |
U-2 OS |
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|
人恶性黑色素瘤细胞 |
A375 |
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人纤维肉瘤细胞 |
HT-1080 |
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消化系统 |
小鼠结肠癌细胞 |
CT26.WT |
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人回盲肠癌细胞 |
HCT-8 |
|
|
人结肠癌细胞 |
HCT 116 |
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|
HT-29 |
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人结肠腺癌细胞 |
SW480 |
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|
人结直肠癌细胞 |
LoVo |
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|
人食管鳞癌细胞 |
KYSE-150 |
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|
人胃癌细胞 |
HGC-27 |
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呼吸系统 |
小鼠肺癌细胞 |
LLC |
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仓鼠肺细胞 |
V79 |
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人正常肺上皮细胞 |
BEAS-2B |
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人大细胞肺癌细胞 |
NCI-H460 |
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人非小细胞肺癌细胞 |
NCI-H1299 |
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A549 |
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|
人肺鳞癌细胞 |
SK-MES-1 |
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|
NCI-H520 |
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泌尿系统 |
小鼠肾小球系膜细胞 |
SV40 MES 13 |
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大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 |
PC-12 |
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大鼠肾细胞 |
NRK |
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非洲绿猴肾细胞 |
Vero |
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恒河猴肾细胞 |
LLC-MK2 |
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人膀胱癌细胞 |
5637 |
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人前列腺癌细胞 |
PC-3 |
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|
人胚肾细胞 |
293 Cells, low passage |
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|
人肾细胞腺癌细胞 |
786-O |
|
|
ACHN |
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|
脑和神经系统 |
小鼠垂体瘤细胞 |
AtT-20 |
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大鼠胶质瘤细胞 |
C6 |
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|
人胶质瘤细胞 |
U251 |
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|
人神经母细胞瘤细胞 |
SK-N-SH |
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|
内分泌系统 |
小鼠乳腺癌细胞 |
4T1 |
|
人乳腺癌细胞 |
MCF-7 |
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|
MDA-MB-231 |
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|
生殖系统 |
仓鼠卵巢细胞亚株 |
CHO-K1 |
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人宫颈癌细胞 |
Hela |
|
|
人卵巢癌细胞 |
SK-OV-3 |
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|
循环系统 |
小鼠成肌细胞 |
C2C12 |
|
大鼠成肌细胞 |
L6 |
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|
大鼠心肌细胞 |
H9c2(2-1) |
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