Cyagen Oricell

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        • OriCell®Caco-2人结直肠腺癌细胞系
        • OriCell®T84 人结肠腺癌肺转移细胞系
        • OriCell®HCT 116人结肠癌细胞系
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        • OriCell®LoVo 人结肠癌细胞系
        • OriCell®LS 174T人结肠腺癌细胞系
        • OriCell®HCT-8人回盲肠癌细胞系
        • OriCell®KYSE-150人食管鳞癌细胞系
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        • OriCell®Hep G2人肝癌细胞系
        • OriCell®RBE人肝胆管癌细胞系
        • OriCell®HuH-7人肝癌细胞系
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        • OriCell®HCT-15人结肠癌细胞系
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        • OriCell®Hce-8693人盲肠腺癌细胞系
        • OriCell®CW-2人结肠癌细胞系
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        • OriCell®Hepa 1-6 小鼠肝癌细胞系
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        • OriCell®AML-12小鼠正常肝细胞系
        • OriCell®H-4-II-E大鼠肝细胞系
        • OriCell®RIN-m5F大鼠胰岛β细胞瘤细胞系
        • OriCell®INS-1 大鼠胰岛素瘤细胞系
        • OriCell®IPEC-J2猪小肠上皮细胞系
      • ● 循环(心血管)系统
        • OriCell®NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者自然杀伤细胞系
        • OriCell®U266B1人外周淋巴细胞系
        • OriCell®HL-60人原髓细胞白血病细胞系
        • OriCell®K-562人慢性髓系白血病细胞系
        • OriCell®CCRF-CEM人急性淋巴细胞白血病T淋巴细胞系
        • OriCell®Reh人急性非B非T淋巴细胞白血病系
        • OriCell®HuT78人T淋巴细胞白血病细胞系
        • OriCell®Jurkat,Clone E6-1人白血病T淋巴细胞系
        • OriCell®THP-1人单核细胞白血病细胞系
        • OriCell®Nalm-6成人B型急性淋巴细胞白血病细胞系
        • OriCell®H9人T淋巴细胞系
        • OriCell®RAW264.7小鼠单核细胞白血病细胞系
        • OriCell®Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞系
        • OriCell®MC3T3-E1 Subclone 14 小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14细胞系
        • OriCell®H9c2(2-1) 大鼠心肌细胞系
      • ● 呼吸系统
        • OriCell®BEAS-2B 人正常肺上皮细胞系
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        • OriCell®HCC827 人非小细胞肺癌细胞系
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        • OriCell®CCC-HPE-1人胚胎肺成纤维细胞
        • OriCell®NCI-H2126人肺癌细胞系
        • OriCell®NCI-H661人大细胞肺癌细胞系
        • OriCell®NCI-H23人非小细胞肺癌细胞系
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        • OriCell®NCI-H1395人非小细胞肺癌细胞系
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        • OriCell®NCI-H524人非小细胞肺癌细胞系
        • OriCell®NCI-H226人肺鳞癌细胞系
        • OriCell®LL/2(LLC1、LLC) 小鼠Lewis肺癌细胞系
        • OriCell®KLN 205小鼠肺鳞癌细胞系
        • OriCell®LA795小鼠肺腺癌细胞系
        • OriCell®V79仓鼠肺细胞系
      • ● 生殖系统
        • OriCell®CHO-K1仓鼠卵巢细胞亚株系
        • OriCell®C-33 A人宫颈癌细胞系
        • OriCell®Hela人宫颈癌细胞系
        • OriCell®LNCaP Clone FGC 人前列腺癌细胞系
        • OriCell®PC-3 人前列腺癌细胞系
        • OriCell®SK-OV-3人卵巢癌细胞系
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        • OriCell®Ishikawa人子宫内膜癌细胞系
        • OriCell®RL95-2人子宫内膜癌细胞系
        • OriCell®MS751人子宫颈表皮癌细胞系
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        • OriCell®15P-1小鼠睾丸上皮细胞系
        • OriCell®TM3小鼠睾丸间质细胞系
        • OriCell®TM4小鼠睾丸支持细胞系
        • OriCell®RM-1小鼠前列腺癌细胞系
        • OriCell®LLC-WRC 256大鼠腹水癌细胞系
      • ● 泌尿系统
        • OriCell®HK-2人肾近曲小管细胞系
        • OriCell®ACHN人肾腺癌细胞系
        • OriCell®HEK 293人胚肾细胞系
        • OriCell®293-L.P人胚肾细胞系
        • OriCell®786-0人肾细胞腺癌细胞系
        • OriCell®Caki-1人肾透明细胞癌细胞系
        • OriCell®SW-13人肾上腺皮质小细胞癌细胞系
        • OriCell®5637人膀胱癌细胞系
        • OriCell®TCCSUP人膀胱癌细胞系
        • OriCell®T24 人膀胱移行细胞癌细胞系
        • OriCell®HEK-293T(293T)人胚肾细胞系
        • OriCell®HEK 293A人胚肾细胞系
        • OriCell®Renca小鼠肾癌细胞系
        • OriCell®MBT2小鼠膀胱移形癌细胞系
        • OriCell®NRK大鼠肾细胞系
        • OriCell®PC-12大鼠肾上腺啫铬细胞瘤细胞系
        • OriCell®NRK-52E大鼠肾小管上皮细胞
      • ● 神经系统
        • OriCell®SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞系
        • OriCell®SK-N-SH人神经母细胞瘤细胞系
        • OriCell®LN229人胶质瘤细胞系
        • OriCell®U251人胶质瘤细胞系
        • OriCell®U-87 MG人脑星形胶质母细胞瘤细胞系
        • OriCell®ARPE-19人视网膜色素上皮细胞系
        • OriCell®BeWo人绒毛膜肿瘤细胞系
        • OriCell®T98G人脑胶质瘤细胞系
        • OriCell®Neuro-2a小鼠神经母细胞瘤细胞系
        • OriCell®HT-22 小鼠海马神经元细胞系
        • OriCell®GL261 小鼠神经胶质瘤细胞系
        • OriCell®HEI-OC1小鼠耳蜗毛细胞系
        • OriCell®BEND.3小鼠脑微血管内皮细胞系
        • OriCell®C6大鼠胶质瘤细胞系
      • ● 内分泌系统
        • OriCell®BHK-21仓鼠肾成纤维细胞系
        • OriCell®HPDE6-C7人正常胰腺导管上皮细胞系
        • OriCell®ZR-75-1人乳腺癌细胞系
        • OriCell®MCF-7人乳腺癌细胞系
        • OriCell®MDA-MB-231人乳腺癌细胞系
        • OriCell®T-47D人乳腺管癌细胞系
        • OriCell®SK-BR-3人乳腺腺癌细胞系
        • OriCell®PANC-1人胰腺癌细胞系
        • OriCell®HPAF-II人胰腺癌细胞系
        • OriCell®BxPC-3人原位胰腺腺癌细胞系
        • OriCell®AsPC-1人转移胰腺腺癌细胞系
        • OriCell®FTC-133人滤泡状甲状腺癌细胞系
        • OriCell®CAL-62人甲状腺癌细胞系
        • OriCell®BHT101人甲状腺癌细胞系
        • OriCell®KMH-2人甲状腺癌细胞系
        • OriCell®8305C人甲状腺癌细胞系
        • OriCell®B-CPAP人甲状腺乳头状癌细胞系
        • OriCell®SW579人甲状腺鳞癌细胞系
        • OriCell®TT人甲状腺导管癌细胞系
        • OriCell®AtT-20小鼠垂体瘤细胞系
        • OriCell®4T1小鼠乳腺癌细胞系
        • OriCell®Beta-TC-6小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞系
        • OriCell®Pan02小鼠胰腺癌细胞系
        • OriCell®EMT-6小鼠乳腺癌细胞系
        • OriCell®LLC-MK2恒河猴肾细胞系
        • OriCell®Vero 非洲绿猴肾细胞系
        • OriCell®COS-7非洲绿猴SV40转化的肾细胞系
        • OriCell®PK-15猪肾细胞系
      • ● 免疫系统
        • OriCell®U-937人组织细胞淋巴瘤细胞系
        • OriCell®RAJI人Burkitt's淋巴瘤细胞系
        • OriCell®HMy2.CIR人B淋巴母细胞系
        • OriCell®A375 人恶性黑色素瘤细胞系
        • OriCell®A-431人皮肤鳞癌细胞系
        • OriCell®SK-MEL-28 人皮肤恶性黑色瘤细胞系
        • OriCell®SU-DHL-2人弥漫性组织淋巴瘤细胞系
        • OriCell®A875 人黑色素瘤细胞系
        • OriCell®HaCaT人永生化表皮细胞系
        • OriCell®3T3-L1 小鼠胚胎成纤维细胞(前脂肪细胞)系
        • OriCell®3T3-swiss albino小鼠胚胎成纤维系
        • OriCell®NIH/3T3小鼠胚胎成纤维细胞系
        • OriCell®EL4小鼠淋巴瘤细胞系
        • OriCell®B16小鼠黑色素瘤细胞系
        • OriCell®YUMM1.7 小鼠黑色素瘤细胞系
        • OriCell®B16-F10 小鼠皮肤黑色素瘤细胞系
        • OriCell®P388D1小鼠淋巴样瘤细胞系
        • OriCell®E.G7-OVA小鼠T淋巴瘤细胞系
        • OriCell®Ana-1小鼠巨噬细胞系
        • OriCell®C1498小鼠白血病细胞系
        • OriCell®P815小鼠肥大细胞瘤细胞系
        • OriCell®B16BL6 小鼠黑色素瘤细胞系
      • ● 运动(肌肉)系统
        • OriCell®HT-1080人纤维肉瘤系
        • OriCell®MG-63人骨肉瘤细胞系
        • OriCell®U-2 OS人骨肉瘤细胞系
        • OriCell®RD人恶性胚胎横纹肌瘤细胞系
        • OriCell®Saos-2人成骨肉瘤细胞系
        • OriCell®SW1353人软骨肉瘤细胞系
        • OriCell®A-673人横纹肌肉瘤细胞系
        • OriCell®C2C12小鼠成肌细胞系
        • OriCell®L6大鼠成肌细胞系
    • 荧光细胞系
      • ● 标记的细胞系
        • OriCell®A549 with GFP
        • OriCell®A549 with RFP
        • OriCell®A549 with Luciferase & GFP
        • OriCell®HCT 116 with GFP
        • OriCell®HCT 116 with RFP
        • OriCell®HCT 116 with Luciferase & GFP
        • OriCell®HT-29 with GFP
        • OriCell®HT-29 with RFP
        • OriCell®HT-29 with Luciferase & GFP
        • OriCell®Hep G2 with RFP
        • OriCell®MGC-803 with GFP
        • OriCell®MGC-803 with RFP
        • OriCell®MGC-803 with Luciferase & GFP
        • OriCell®KYSE520 with GFP
        • OriCell®KYSE520 with RFP
        • OriCell®KYSE520 with Luciferase & GFP
        • OriCell®MCF-7 with GFP
        • OriCell®MCF-7 with RFP
        • OriCell®MDA-MB-231 with GFP
        • OriCell®MDA-MB-231 with RFP
        • OriCell®BXPC-3 with GFP
        • OriCell®BXPC-3 with RFP
        • OriCell®BXPC-3 with Luciferase & GFP
        • OriCell®TCCSUP with GFP
        • OriCell®TCCSUP with RFP
        • OriCell®TCCSUP with Luciferase & GFP
        • OriCell®Hela with GFP
        • OriCell®Hela with RFP
        • OriCell®Hela with Luciferase & GFP
        • OriCell®SK-OV-3 with GFP
        • OriCell®SK-OV-3 with RFP
        • OriCell®U251 with GFP
        • OriCell®U251 with RFP
        • OriCell®U251 with Luciferase & GFP
        • OriCell®U-87 MG with GFP
        • OriCell®U-87 MG with RFP
        • OriCell®U-87 MG with Luciferase & GFP
        • OriCell®CT26.WT with GFP
        • OriCell®CT26.WT with RFP
        • OriCell®CT26.WT with Luciferase & GFP
        • OriCell®Hepa 1-6 with GFP
        • OriCell®Hepa 1-6 with RFP
        • OriCell®Hepa 1-6 with Luciferase & GFP
        • OriCell®4T1 with GFP
        • OriCell®4T1 with RFP
        • OriCell®Pan02 with GFP
        • OriCell®Pan02 with RFP
        • OriCell®Pan02 with Luciferase & GFP
        • OriCell®MBT2 with GFP
        • OriCell®MBT2 with RFP
        • OriCell®EMT-6 with GFP
        • OriCell®EMT-6 with RFP
        • OriCell®EMT-6 with Luciferase & GFP
  • 细胞培养试剂
    • 进口牛血清
      • ● OriCell®特级胎牛血清
      • ● OriCell®优级胎牛血清
      • ● OriCell®标准级胎牛血清
      • ● OriCell®去外泌体血清
      • ● OriCell®新生牛血清
      • ● OriCell®成年牛血清
    • 细胞培养基
      • ● 干细胞完全培养基
        • 骨髓间充质干细胞完全培养基
        • 脂肪间充质干细胞完全培养基
        • 胚胎干细胞完全培养基
        • 神经干细胞完全培养基
        • 脐带脐血肌腱干细胞完全培养基
        • 牙髓间充质干细胞完全培养基
        • 内皮细胞完全培养基
        • 神经元完全培养基
        • 星形胶质细胞完全培养基
        • 成纤维细胞完全培养基
      • ● 干细胞诱导分化试剂盒
        • 成骨诱导分化试剂盒
        • 成脂诱导分化试剂盒
        • 成软骨诱导分化试剂盒
        • 拟胚体(EB)形成试剂盒
        • 成神经元诱导分化试剂盒
        • 成星形胶质细胞诱导分化试剂盒
        • 成肝细胞诱导分化试剂盒
      • ● 干细胞无血清培养基
        • OriCell®成人骨髓间充质干细胞完全培养基(无血清Ⅱ型)
        • OriCell®成人脂肪间充质干细胞完全培养基(无血清Ⅱ型)
        • OriCell®人脐带间充质干细胞完全培养基(无血清Ⅱ型)
        • OriCell®人脐血间充质干细胞完全培养基(无血清II型)
        • OriCell®人牙髓间充质干细胞完全培养基(无血清 II 型)
      • ● 干细胞去外泌体完全培养基
        • 骨髓间充质干细胞去外泌体完全培养基
        • 脂肪间充质干细胞去外泌体完全培养基
        • 脐带脐血间充质干细胞去外泌体完全培养基
        • 牙髓间充质干细胞去外泌体完全培养基
      • ● 细胞系完全培养基
        • 消化系统相关培养基
        • 循环(心血管)系统相关培养基
        • 呼吸系统相关培养基
        • 生殖系统相关培养基
        • 泌尿系统相关培养基
        • 神经系统相关培养基
        • 免疫系统相关培养基
        • 内分泌系统相关培养基
    • 细胞培养辅助产品
      • ● 细胞冻存液
        • OriCell®通用无蛋白非程序冻存液
        • OriCell®通用血清型非程序冻存液
        • OriCell®神经干细胞无蛋白非程序冻存液
        • OriCell®神经干细胞无蛋白程序冻存液
      • ● 细胞因子
        • 白介素
        • 生长因子
        • 肿瘤坏死因子
        • 集落刺激因子
        • 干扰素
        • 趋化因子
        • 其它因子
      • ● 干细胞检测试剂盒
        • OriCell®间充质干细胞(人)表面标记检测试剂盒
        • OriCell®间充质干细胞(大鼠)表面标记检测试剂盒
        • OriCell®间充质干细胞(小鼠)表面标记检测试剂盒
      • ● 生长添加物
        • OriCell®NEAA细胞培养添加物(100×)
        • OriCell®ITS细胞培养添加物(100×)
        • OriCell®L-Glutamine (100×)谷氨酰胺添加物
      • ● 染色液
        • OriCell®油红O染色液 (Oil Red O Solultion)
        • OriCell®茜素红染色液 (Alizarin Red S Solution)
        • OriCell®阿利辛蓝染色液 (Alcian Blue 8GX Solultion)
      • ● 抗生素
        • OriCell®青霉素-链霉素溶液(100X)
        • OriCell®青霉素-链霉素-两性霉素B溶液(100X)
        • OriCell®青霉素-链霉素-庆大霉素溶液(100X)
        • OriCell®支原体清除试剂(100X)
      • ● 缓冲液
        • OriCell®PBS缓冲液(1X)
        • OriCell®Hank's Balanced Salt Solution(HBSS)
      • ● 蛋白酶
        • OriCell®胰蛋白酶细胞消化液(0.25%)
        • OriCell®无动物蛋白胰酶替代物
        • OriCell®Collagenase Type I (0.1%) 一型胶原蛋白酶
      • ● 辅剂
        • OriCell®明胶溶液(0.1%)
        • OriCell®Poly-L-lysine 多聚-L-赖氨酸
  • 细胞技术服务
    • 干细胞提取与鉴定服务
    • 干细胞定向诱导分化服务
    • 胎牛血清筛选服务
  • 市场活动
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虽然一“墩”难求,但是间充质干细胞的漂亮软骨球立刻有!

在大多数干细胞实验研究中,诱导分化成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞已经成为鉴定其分化潜能的金标准。

前面我们已经分享了成骨诱导分化、成脂诱导分化的操作,本期来到三系分化的最后一站——成软骨诱导分化操作讲解!

 

成软骨诱导分化

软骨的破坏、缺失是骨关节炎(Osteoarthritis,OA)在内的多种骨科疾病的重要病理改变。由于软骨特殊的解剖及组织特性,如缺乏血管和淋巴管的分布,使得其自我修复能力异常不足,因此通过人工方法修复软骨破坏具有重要临床意义。

近年来,随着间充质干细胞(MSC)的发现和研究深入,其来源广泛、良好的增殖能力、多分化潜能、与各种3D支架材料具有良好的生物相容性等优良特性,使得其在软骨修复应用中具有令人期待的应用潜力。

 

MSC成软骨分化的过程:

MSC首先收回其突起,聚集成团,这个团中间的细胞经分裂分化转变成一种大而圆的细胞,即成软骨细胞;成软骨细胞产生基质和纤维(主要为II型胶原蛋白),当基质的量增加到一定程度时,成软骨细胞被分隔在陷窝内,分化为成熟的软骨细胞。

 

体外诱导成软骨分化的鉴定

主要是形态学观察、阿利辛蓝染色,以及检测成软骨的标志物——II型胶原蛋白来进行,包括通过免疫组化、Western Blot检测II型胶原蛋白的表达,以及RT-PCR检测II型胶原蛋白的mRNA的表达等不同的角度进行鉴定;而阿利辛蓝则主要检测成软骨细胞内酸性粘多糖。

OriCell® 间充质干细胞成软骨诱导分化阿利辛蓝染色效果

间充质干细胞间充质干细胞间充质干细胞

大鼠骨髓间充质干细胞                人骨髓间充质干细胞                    小鼠脂肪间充质干细胞

 

实操走起

所需材料

● OriCell® 间充质干细胞成软骨诱导分化试剂盒(套装内含基础培养基、成软骨诱导添加物、阿利辛蓝染色液)

● 4%多聚甲醛溶液或10%福尔马林溶液

 

实验操作步骤

1. 将3~4×105个待诱导细胞转移到15mL离心管中,20℃,250×g离心4min。

2. 吸去上清。加入0.5 mL成软骨诱导分化预混液,重悬上一步离心所得沉淀,20℃,150×g 离心 5min。

3. 重复步骤2,再次清洗细胞。

4. OriCell® 间充质干细胞成软骨诱导分化添加物II(以下简称添加物II)的添加,按照比例(1mL成软骨诱导分化预混液中加入10μL添加物II),吸取实验所需剂量的添加物II,加入相应体积的预混液中配制成成软骨诱导分化完全培养基,轻柔吹打混匀。

5. 将步骤3所得细胞沉淀用0.5mL成软骨诱导分化完全培养基重悬,20℃,150×g离心5 min。

6. 拧松离心管盖以便于气体交换。将其竖立放置于37℃、5%CO2、饱和湿度的CO2培养箱中培养。

7. 当细胞团出现聚团现象时(一般为 24 h 或 48 h 后,视实际情况而定),轻弹离心管底部使软骨球脱离管底悬浮在液体中。

8.自接种开始计算,每隔2~3 d给细胞换用新鲜的成软骨诱导分化完全培养基,每管约0.5mL。

9.持续诱导,直至管内形成直径1.5~2 mm的软骨球,即可准备切片染色。

 

注意事项

1、吸取添加物II之前需短暂离心试剂管,使试剂聚集于管底以便取用。

2、务必将添加物II分装保存在-20℃以下,避免反复冻融,可保存12个月。

3、加入添加物II的成软骨诱导分化完全培养基务必现配现用,4℃保存不可超过12h。

4、步骤6不需要吸去上清或重悬细胞;24h之内不要晃动离心管。

5、步骤8,每次更换培养基后,都需轻弹离心管,使软骨球脱离管底悬浮在液体中;且更换培养基后务必拧松离心管盖再放入培养箱中。

 

软骨球切片染色操作步骤

注意:本步骤以石蜡切片染色为例。若使用冰冻切片,请遵照切片机使用规程。

1. 固定。诱导形成的软骨球用1×PBS清洗后,浸泡于4%多聚甲醛溶液(或10%福尔马林溶液),固定30min以上。注意:固定液需现配现用。

2. 脱水。固定好的软骨球使用梯度浓度酒精脱水,方式如下,每一阶段30 min。

50%酒精→70%酒精→80%酒精→95%酒精→无水酒精

注意:

1)脱水必须在有盖的容器中进行,防止吸收空气中的水分;

2)软骨球不要在酒精中浸泡太久,易碎裂;

3)在更换酒精时,可吸出低浓度酒精,再加入高浓度酒精。避免移动增加软骨球碎裂的风险。

3. 透明。因酒精和石蜡不相溶,所以脱水后需经二甲苯过渡。方式如下:

  • 二甲苯和无水酒精按体积比 1:1 混匀。将软骨球浸泡其中 2 h。
  • 将软骨球浸泡在纯二甲苯中 1.5 h。
  • 更换新的二甲苯,继续浸泡 1 h。

注意:

1)透明必须在有盖的容器中进行,防止吸收空气中的水分;

2)透明过程中,如果软骨球周围出现白色雾状气泡,说明其中水未被脱净。应重新放回酒精中脱水再透明。

4. 浸蜡。为了除去软骨球中的透明剂,使石蜡渗透到内部以便包埋,需要浸蜡处理。

  • 二甲苯和石蜡按体积比 1:1 混匀。将软骨球浸泡其中,再一起放置于 40℃烘箱中 40 min。
  • 将软骨球浸泡在纯石蜡中,放置于 55℃烘箱中 30 min。

注意:

1)浸蜡尽量保持在较低温度中进行,石蜡不凝固即可;

2)温度要恒定,不可忽高忽低。

5. 包埋。将软骨球取出,置于模具中。倒入石蜡,静置冷却。待石蜡充分冷却成形,取出,修整蜡块。

6. 切片。连续切片,每片厚度 3 μm。

7. 粘片。将软骨球切片用粘贴剂粘附于载玻片上,在 35℃烘箱中烘干。

8. 脱腊。

  • 纯二甲苯浸泡切片 15 min,更换新的二甲苯浸泡切片 10 min。
  • 二甲苯和无水酒精按体积比 1:1 混匀。浸泡切片 10 min。
  • 依次使用 95%、85%、70%、50%酒精浸泡切片 10 min,晾干。

9. 染色。

  • 在晾干的切片上滴加阿利辛蓝,37℃染色 1 h。
  • 用自来水冲洗载玻片 5 min,晾干。

10. 显微镜下观察阿利辛蓝染色效果。阿利辛蓝染色部分显示的是软骨组织中的内酸性粘多糖。

 

赛业OriCell®干细胞诱导分化

干细胞诱导分化

依赖于成熟的干细胞技术平台,我们可以为您开展多种干细胞分化潜能研究的实验服务。其中针对特定种属优化定制的诱导分化试剂盒,可向成骨、成脂、成软骨、成肝等多个方向诱导,性能稳定,诱导分化效果好!同时,我们可以按照您提供的诱导试剂和诱导方法为您完成特定的干细胞诱导实验,也可以按照您的目的和要求,在各种干细胞诱导途径中为您探索出一套相对完善的方法。

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