MSC成软骨分化的过程

如果软骨球散了，有补救方法吗？

• 成软骨诱导易犯的错误操作！
• 细胞接种量：未按照推荐量，细胞量太多太少都不利于成球。
• 换液/移液过猛：枪头直接冲击软骨球，破坏细胞间连接与基质。
• 培养容器不当：用普通贴壁板/管，细胞贴壁导致微团被撕裂。
• 成球阶段扰动：成球前24–48小时频繁移动/晃动，细胞无法形成稳定聚集体。

解决方案：

• 前期弹散的球，仅细胞聚集体、基质少，轻微散了可重新聚集成球。
• 中后期弹散的球，难以重新聚集，已无法补救，建议重新进行成软骨诱导流程。

成软骨诱导操作要点——从源头避免软骨球散掉

1.细胞准备：

2.试剂准备：

诱导成球操作（黄金标准）：

• 每管/孔3–4×10⁵个细胞。
• 成软骨液重悬后，200×g离心4分钟，形成紧密细胞沉淀（务必不能吹打！！！）。
• 拧松离心管盖，直立静置培养24小时，绝对不移动离心管，待自发形成紧实微球后再轻弹悬浮。每次换液之前需要将细胞团弹起以便与诱导液充分接触。
• 细胞团直径增至1.5mm~2mm左右时终止诱导，进行后续的石蜡切片以及阿利新蓝染色鉴定。

换液规范：

加液操作：

培养基质控：

环境稳定：

注意事项：