2025年9月，南京大学医学院附属鼓楼医院运动医学与成人重建外科蒋青、郭保生、陈响教授团队在细胞外囊泡领域权威期刊Journal of Extracellular Vesicles（IF 14.5）上发表了题为“Targeted Blockage of Pathological Extracellular Vesicles and Particles From Fibroblast-Like Synoviocytes for Osteoarthritis Relief: Proteomic Analysis and Cellular Effect”的研究成果。该研究通过整合临床样本分析、动物模型验证及多组学技术，系统揭示了OA状态下炎症性与衰老性FLS来源的致病性囊泡（EVP）在多细胞层面驱动关节退变的机制，并创新性地开发了一种基于滑膜靶向性腺相关病毒载体的基因治疗策略，为OA的疾病修饰治疗提供了新思路。

文献截图

1. 组学与生物信息学分析方面：对FLS来源的EVP进行了高通量蛋白质组学分析；整合挖掘了GEO数据库中的转录组学数据，并利用生物信息学工具进行通路富集和网络分析。

2. 分子与细胞生物学技术包括：qPCR、Western Blot、ELISA、成软骨分化及阿利新蓝染色、免疫荧光染色、免疫组织化学染色、SA-β-gal衰老染色、EdU/TUNEL检测等。

3. 外泌体研究技术主要为：差速超速离心分离纯化、纳米颗粒追踪分析与透射电镜表征、以及荧光标记示踪内化实验。

4. 基因操作与递送技术包括：慢病毒介导的基因敲低和AAV载体构建与关节腔内注射。

5. 组织病理学评估：H&E、番红O固绿、甲苯胺蓝等染色。

图1. 技术路线

• OA滑膜组织中外泌体分泌通路显著激活

通过分析OA患者与正常滑膜的转录组数据，研究发现与“细胞外囊泡”相关的生物学通路在OA组织中显著富集。关键调控基因RAB27A的表达在OA滑膜中明显上调，且与炎症标志物（IL6、MMP13）和衰老标志物（CDKN1A）的表达呈显著正相关。组织免疫荧光进一步证实，在OA滑膜组织中，RAB27A蛋白主要高表达于呈现炎症或衰老表型的滑膜成纤维样细胞中。体外实验表明，经炎症诱导或衰老诱导的FLS所分泌的EVP，在颗粒数量与蛋白总量上均显著高于正常FLS，提示病理状态下的FLS具有EVP高分泌的特征。

图2. OA滑膜与FLS中囊泡分泌显著增强

• 不同病理来源EVP具有特征性蛋白质组学图谱

研究对正常、炎症及衰老FLS来源的EVP进行了深度蛋白质组学分析。结果显示，三种EVP的蛋白组成存在显著差异，其中炎症性EVP富集了与炎症信号传导相关的蛋白，而衰老性EVP则主要富集了参与细胞周期调控和DNA修复过程的蛋白。这一发现表明，EVP的分子载荷能够精确反映其亲本细胞的病理状态，提示其可能作为疾病状态的信号载体参与细胞间通讯。通过对差异表达蛋白进行功能富集分析，研究发现致病性EVP中显著变化的蛋白主要参与软骨发育、胶原代谢以及炎症反应等生物学过程。进一步的整合分析表明，这些差异蛋白与公共数据库中OA软骨退变、间充质干细胞成软骨分化抑制以及巨噬细胞M1极化相关的基因集存在高度重叠，从生物信息学角度支持了致病性EVP可能通过多途径协同驱动OA进展的假说。

图3. 致病性EVP蛋白组成与OA病理进程密切相关

• 致病性EVP破坏软骨细胞稳态并驱动巨噬细胞向促炎表型极化

• 致病性EVP损害间充质干细胞的软骨向分化能力

• 靶向抑制RAB27A可有效阻断致病性EVP分泌并缓解OA病理进程

图7. 研究机制示意图

原文检索：

Liu, B., Xian, Y., Shen, T., Ben, Y., Wu, W., Shi, Y., An, X., Peng, R., Gao, W., Gong, W., Chen, X., Guo, B., & Jiang, Q. (2025). Targeted blockage of pathological extracellular vesicles and particles from fibroblast‐like synoviocytes for osteoarthritis relief: Proteomic analysis and cellular effect. Journal of Extracellular Vesicles, 14, e70162. https://doi.org/10.1002/jev2.70162