神经干细胞悬浮培养,贴壁了怎么办?
神经干细胞(Neural Stem Cells, NSCs)是一类多能干细胞,可以分化为神经系统的多种细胞,包括神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞等等,在当前神经科学领域的研究中发挥着重要作用。

图1. 从小鼠脑室下区分离神经干细胞并形成神经球培养。
神经干细胞可以用悬浮培养和贴壁培养两种方式。目前实验室更常用的是悬浮培养这种经典方法。和贴壁培养比起来,它有哪些优缺点呢?核心差别主要在细胞生长环境、干性维持能力和操作难度上,两种方法各有千秋,适合不同的研究需求。接下来赛业生物OriCell®为您具体分析。
适用场景:
需要长期维持干细胞干性、大规模制备种子细胞、后续进行体内移植实验。
优势:
1. 干性维持更优:细胞间相互作用强,长期培养更易保留自我更新和多向分化潜能,不易自发分化。
2. 扩增效率高:神经球立体生长,单位体积细胞密度高,适合大规模快速扩增。
3. 操作相对简便:无需包被培养瓶/皿,减少基质带来的污染和成本,传代时只需机械吹打或酶解神经球。
劣势:
1. 细胞状态不均一:神经球内部易出现缺氧、营养匮乏,中心细胞易凋亡、分化,球内外细胞干性和增殖能力存在差异。
2. 观察与检测困难:无法直接通过普通显微镜清晰观察单个细胞形态,流式、免疫荧光等检测需先解离神经球。
3. 易结团:吹打力度不当会导致神经球过大或过度解离,影响细胞活性。
适用场景:
适合体外分化诱导、基因操作、药物筛选、细胞形态和分子机制研究等需要精细操作的实验。
优势:
1. 细胞状态均一,便于观察:单层贴壁生长,容易观察细胞形态、增殖和分化状态,便于监测污染和细胞活力。
2. 便于实验操作:易进行转染、药物处理、免疫荧光染色、单细胞取样等操作,实验结果重复性好。
3. 细胞解离均匀:胰酶消化后可获得均一的单细胞悬液,适合各类体外分化、分子机制研究。
劣势:
1. 干性易丢失:长期贴壁容易诱导自发分化,尤其是胶质分化。
2. 操作繁琐,成本高:培养前需用多聚赖氨酸、层粘连蛋白等基质包被器皿,步骤复杂,且基质批次差异可能影响实验结果。
3. 扩增受限:单层生长空间有限,需频繁传代,增加污染风险和操作成本。
赛业生物OriCell®在长期的干细胞研究中,针对神经干细胞研究可提供鼠源的原代神经干细胞现货(鉴定完整)和对应的完全培养基(无血清)。其中,神经干细胞以悬浮的神经球形式培养,在低代次冻存,以减少因培养环境因素可能会使细胞造成的分化影响。

OriCell®小鼠神经干细胞,P2代次冻存,规格1×106,可在体外传代3次以上依然保持各项指标合格。

OriCell®小鼠神经干细胞完全培养基(无血清),货号MUXNF-90011,规格100mL/kit。
如果神经干细胞悬浮培养时出现贴壁属于异常生长,可能会影响细胞的生长和分化。以下是一些赛业生物OriCell®推荐的处理方法:
1. 培养器皿:选择经超低吸附(Ultra-LowAttachment)处理的培养皿或培养瓶进行培养。
2. 培养基成分:严格使用无血清培养基,避免血清诱导分化。
3.细胞密度:神经干细胞需较高密度(建议1.5-3×10⁵cells/mL)以促进细胞间接触,形成神经球。
4. 传代操作:收集未贴壁的神经球上清,再使用无菌的PBS轻轻冲洗贴壁不牢的细胞,合并一起;经离心后,用1mL枪头轻柔吹打将神经球分散成单个细胞,按照1:2或者1:3的比例重新接种细胞。
5. 排查污染:检测细胞是否存在支原体、细菌污染,若发现污染,应立即丢弃细胞,彻底消毒培养箱和器材。
6. 若细胞反复贴壁,建议更换新批次细胞或重新复苏冻存细胞。
神经干细胞培养要点:
1. 当神经干细胞出现神经球较大(神经球中央暗淡)或部分神经球出现贴壁分化时需立即传代。一般情况下,小鼠神经干细胞2~3天传代一次。
2. 传代时注意控制吹打力度,以防细胞破损。
3. 神经干细胞对温度敏感,较低的室内温度和过长的观察时间会造成神经球相互粘连。
赛业生物OriCell®可提供标准的原代神经干细胞及配套培养体系,严格质控,现货现购,另可利用我们自身成熟的干细胞技术和经验,为你完成从神经干细胞原代提取、分化潜能研究等一系列技术服务。
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产品名称 |
货号 |
规格 |
| 原代神经干细胞现货 | ||
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RASNF-01001 |
1*10^6 |
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SD大鼠神经干细胞/GFP |
RASNF-01101 |
1*10^6 |
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MUBNF-01001 |
1*10^6 |
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MUBNF-01101 |
1*10^6 |
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| 神经干细胞专用培养基 | ||
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RAXNF-90011 |
100mL |
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MUXNF-90011 |
100mL |
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HUXNF-90011 |
100mL |
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| 神经干细胞定向诱导分化试剂 | ||
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RAXNX-90081 |
100mL |
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MUXNX-90081 |
100mL |
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RAXNX-90091 |
100mL |
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MUXNX-90091 |
100mL |
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| 神经干细胞专用冻存液 | ||
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GUXNX-07021 |
20mL/50mL |
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GUXNX-07031 |
20mL/50mL |
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