细胞背景

RAW264.7细胞（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞）来源于由阿贝尔森鼠白血病病毒（Abelson leukemia virus，A-MuLV）诱导发生的肿瘤组织，组织取自于成年雄性的BAB/14小鼠。20世纪70年代，由美国加州索尔克生物研究所的发育生物学实验室的W.C.Raschke等人构建，他们将Abelson病毒注射进BAB/14小鼠腹腔，病毒感染发生病变后取材获得；同时构建获得的还有RAW309、RAW309Cr等。

文献报道，RAW264.7不分泌病毒颗粒，此细胞株XC斑点形成试验阴性。可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖；抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。经过LPS或PPD处理2天可诱导分解红血球但对肿瘤靶细胞无作用。其sIg-、Ia-抗原、Thy-1.2等表面蛋白呈阴性。由于它具有吞噬作用和饱饮作用，这种贴壁细胞被认为是巨噬细胞的体外理想模型。RAW264.7细胞还应用于天然产物筛选、破骨细胞研究、微生物免疫调节等领域。此外，还可利用基因编辑RAW264.7细胞验证炎症靶点、巨噬细胞基因功能研究等。

细胞特性：

1. 培养体系：RAW264.7细胞通常在含有10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基中培养，培养温度为37°C，5% CO₂环境。

2. 细胞形态：巨噬细胞样；贴壁生长。

3. 传代时机：细胞汇合度达到70-80%时可进行传代，传代比例1:3-1:5。

适合传代的汇合度

4. 倍增时间：22-26h

5. 注意事项：

细胞生长初期，镜下多以贴壁并呈现长方体、“伪足”延伸等形态，随着培养时间的增加，细胞呈现圆形并以叠加的形式生长。

在细胞培养过程中，细胞吞噬抗原过多、培养条件恶劣或传代后细胞稀疏等情况，都会使细胞呈现出梭形、长梭形的形态，消化难度增加。

当汇合度达到80%以上，细胞会堆叠在一起或部分细胞轻微变圆脱落，以悬浮的方式散落到到培养基中，镜下观察会同时出现悬浮、贴壁两种形态，可将悬浮细胞（上清）收集，与处理后细胞一同离心继续培养。 

FAQ：

1）收货后，细胞不见了或者贴壁极少怎么办？

答：这是因为RAW 264.7细胞快递运输路上受到颠簸，可能会脱落，脱落的细胞悬浮在培养基中不容易聚焦。解决方法：把细胞放进培养箱静置两到四个小时就可以看到了。如果静置后看到的细胞仍偏少，请将瓶子里的培养基都转移到离心管里，265×g离心4 min，即可看到沉淀的细胞。将沉淀重悬接入原培养瓶即可。

2）血清对细胞培养的影响大吗？

答：血清质量差异可能会对细胞生长有影响，建议使用高质量的胎牛血清进行培养，如果没有优质胎牛血清，可适当提高血清浓度进行培养。质量差的血清可能会导致细胞分化的情况出现。

OriCell®提供的OriCell®RAW 264.7细胞系完全培养基，包含适合RAW 264.7细胞系生长的基础培养基、新西兰优级胎牛血清及细胞生长所需的其他添加物。

3）细胞分化了怎么办？

答：依据我们的经验，要考虑以下2种情况：

①细胞的接种密度要合理，当细胞密度很低的时候细胞容易出现分化的情况，因此在接种时细胞密度应合理控制好，推荐进行高比例的传代；

②若已分化的细胞占比很大，通过传代可以改善细胞分化的占比，由于RAW264.7细胞生长速度很快，一般2-3天即可传代，这时分化情况会有所改善；分化的细胞贴壁牢固，难以吹下？，所以在传代过程中可以将容易消化的细胞消化下来，弃掉为难消化下来的分化细胞，如上述操作之后经2-3次传代如上述操作后可得到正常未分化的细胞。

4）总会有细胞有触角是什么原因？

答：

①RAW264.7细胞正常培养中，细胞也会出现多边形和不规则形状，并伴有许多伪足的生成，有时候看到的伪足是细胞正处于迁移状态，不必过多担心。

②巨噬细胞的形态会随着细胞活性、功能、环境和药物的改变而改变。例如，相关研究显示一种低分子量肽（NJP）处理引起RAW264.7细胞形态学改变，胞体增大呈圆形和不规则形状，伪足扩张，而正常对照组巨噬细胞呈圆形，形态正常。

细胞分化图

实验应用

1. 骨骼疾病研究：RAW264.7被广泛应用于破骨细胞的研究，在具体的诱导RAW264.7向破骨细胞分化的实验中，主要用到的诱导因子是RANKL，同时最好选择低传代代数的RAW264.7细胞，当代数超过20代时，RANKL几乎无效。破骨细胞具有骨吸收(bone resorption)的功能，破骨细胞功能异常会造成骨质吸收的异常，若其功能亢进，会引起骨退行性病变如骨质疏松症、癌症的骨转移、关节炎等；若其功能障碍或衰退，会造成骨硬化症、致密性成骨不全、Pagets病、大块骨溶解病等。

2. 炎症研究：RAW264.7细胞也是筛选抗炎活性物和研究炎症最常用的体外研究模型。在诱导剂（如脂多糖LPS）的作用下，RAW264.7细胞会模拟炎症反应，释放或上调多种炎症介质，如一氧化氮（NO）、环氧合酶-2（COX-2）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）等。这使得RAW264.7细胞成为研究炎症过程和开发抗炎药物的宝贵工具。

3. 免疫学研究：RAW264.7细胞还可以用于研究各种刺激物（如细菌、病毒、寄生虫、细胞因子等）对巨噬细胞的影响，以及巨噬细胞在免疫反应中的作用。

4. 药物筛选和毒理学研究：RAW264.7细胞也被广泛用于药物筛选和毒理学研究，以评估药物对巨噬细胞功能和生存能力的影响。

参考文献：

• Functional macrophage cell lines transformed by Abelson leukemia virus.
• Cloning and characterization of osteoclast precursors from the RAW264.7 cell line.
• High-resolution quantitative proteome analysis reveals substantial differences between phagosomes of RAW 264.7 and bone marrow derived macrophages.

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