细胞就像种地的种子，要是种子本身不好，再肥沃的土地也长不出好庄稼。如间充质干细胞（MSC）成骨诱导，你得先确认细胞是不是符合这两个条件：一是细胞活性够不够，如果细胞半死不活，或者传代次数太多，它的分化能力就会下降，根本没力气长出钙结节；二是细胞纯度够不够，如果混进了其他杂细胞，这些“捣乱分子”会抢占营养，影响MSC的成骨分化。建议诱导前尽量选用状态良好、代次较低的MSC，而且确保细胞是经过鉴定的合格MSC。

染色没结果，最直接的可能就是“地里没长庄稼”——钙结节根本没长出来或者长得太少。这就和诱导时间、诱导条件有关了。一般成骨诱导需要2~4周，不同的细胞来源（比如骨髓、脂肪的MSC）时间不一样，如果你只诱导了7天就着急染色，那大概率是看不到的（当然，细胞状态特别好除外）；另外，诱导过程中温度、CO₂浓度这些环境条件得稳定，培养箱别老开门，培养液也别忘换（一般每2~3天换一次），不然细胞“生活环境”太差，也没法好好分化成骨。

染色液就像染料，如果失效了，再有料的东西也染不上色。如赛业OriCell^®茜素红染色液（货号ALIR-10001）是即用型，恢复至室温后即可使用。日常存放2~8℃冰箱保存（别冷热交替），保质期为1年，要是放太久或者储存不当，染色液就会失效，自然染不出颜色。为便利客户完成成套成骨分化实验，购买赛业OriCell^®细胞成骨诱导分化试剂盒会赠送10mL茜素红染色液，批次新鲜。如果是客户自行配制的茜素红染色液，得注意pH值对不对，偏酸或偏碱都会影响结合。

染色不是“泡一泡就行”，时间短了染不上，时间长了背景会变脏，反而看不清。一般染色流程是：细胞固定（用4%多聚甲醛固定30min）→ PBS冲洗2-3次 → 加入茜素红染色液室温染色5-10min → 再用PBS冲洗掉多余染色液。这里的关键是染色时间和冲洗步骤，如果染色效果较差，可适当延长染色时间，让钙结节和染色液更充分结合。

最后一点很重要：不是所有“成骨诱导试剂盒”都通用！赛业OriCell^®是专门做细胞专用型成骨诱导培养基的，比如针对不同种属和组织来源的MSC都有对应的配方。这些配方里的成骨诱导因子浓度和比例都是经过反复优化的，能精准激活细胞的成骨分化通路。假如你用的不是针对特定种属和组织MSC的专用分化试剂，里面的因子浓度不对，就像“给庄稼施错了肥”，要么诱导不了，要么诱导效率特别低。举个例子，如果使用我们的大鼠骨髓MSC成骨诱导试剂来诱导小鼠脂肪MSC，因为配方“不对味儿”诱导效果会大打折扣哦。

Q 染色太红一片模糊？这3个原因得注意

这是最常见的原因！染色后如果只用PBS冲了1次，或者冲洗时间太短，孔里残留的茜素红染色液就会附着在细胞表面，导致整个孔都发红。正确的做法是染色孵育结束后，用PBS轻轻冲洗3-4次，每次冲洗后静置1~2min，让多余的染色液充分流掉，这样才能让钙结节的红色和背景区分开。

就像衣服染太久会颜色太深一样，茜素红染色时间过长（比如超过30min），即使是细胞表面的少量钙盐或者杂质也会结合染色液，造成“全域染红”。建议严格按照说明书控制时间，一般5~10min，具体可以根据前期预实验调整，找到最适合自己细胞的染色时长。

如果诱导前接种的细胞密度太大，细胞长得密密麻麻，分化过程中分泌的钙盐也会连成一片，染色后就会呈现大面积红色，看不到单个的钙结节。接种时要注意细胞密度，一般成骨诱导的接种密度在2.5~4×10⁴ cells/cm²比较合适，让细胞有足够的空间生长和分化，钙结节才能清晰成形。

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