• 超净工作台未定期清洁消毒（如紫外照射时间不足、台面残留污染物）、高效过滤器失效（导致外界细菌进入）。

• 细胞房：空气流通差、地面/面/仪器表面有灰尘或积水（细菌易滋生）、人员进出频繁且未换衣鞋。

• 气溶胶传播：操作时说话、咳嗽产生的飞沫，或移液时液体飞溅形成的气溶胶，携带细菌进入培养瓶。

• 培养基/血清：未严格灭菌、储存过程中密封不严。

• 耗材：培养瓶、移液管、离心管等未灭菌彻底，或使用前被手、台面污染。

• 试剂：胰蛋白酶、抗生素等添加物在配制或分装时引入细菌。

• 手部污染：未戴无菌手套，或手套接触非无菌物品后直接操作。

• 衣物/毛发污染：未穿无菌服、戴口罩和帽子，衣物纤维或毛发落入培养体系。

• 操作不当：移液时枪头触碰培养瓶外壁、瓶口未在酒精灯火焰附近消毒、反复打开培养瓶盖导致暴露时间过长。

• 外购的细胞：供应商质控不严，细胞本身携带“隐性污染”。

• 培养箱：水盘长期未换水，滋生细菌并通过气溶胶扩散，成为细菌繁殖“温床”。

• 离心机：离心管破裂导致液体泄漏，污染转子，后续离心时污染其他样本。

• 生物安全柜/超净台：内部气流紊乱、紫外线灯损坏，无法有效杀菌。

Part 3 细胞细菌污染的主要特征

• 培养基浑浊：最典型特征，肉眼可见培养基短期（24-48小时）从澄清透明变为乳白色、淡黄色或棕色浑浊。

• 沉淀/絮状物：部分细菌（如枯草芽孢杆菌）繁殖后会形成细小沉淀或漂浮絮状物。

• pH值骤降：细菌代谢产生乳酸、乙酸等酸性物质，导致培养基中酚红指示剂从红色变为黄色。

• 细菌形态：显微镜下可见大量微小颗粒状（需注意与细胞碎片区分）、杆状、球状或螺旋状细菌漂浮于培养基中或附着在细胞表面。

• 运动性：部分细菌（如大肠杆菌、变形杆菌）具有鞭毛，可在视野中快速“游走”。

• 细胞形态改变：贴壁细胞贴壁能力下降，逐渐脱落，形态皱缩、边缘模糊；悬浮细胞聚团现象明显，细胞折光性降低，死亡细胞增多。