干细胞技术养成系列丨胚胎干细胞（ESC）拟胚体标准化诱导YYDS！
胚胎干细胞（Embryonic Stem Cell, ESC）是指从囊胚期的内细胞团中分离出来的，能在体外培养、具有发育全能性的干细胞，可自发分化为各种类型的细胞。在体外特定悬浮培养体系中，ESC可自发形成三维拟胚体（Embryoid Body, EB）。该结构包含内、中、外三个胚层组织，其发育过程精确模拟了哺乳动物胚胎从原肠运动前（Pre-gastrulation）至早期原肠运动（Early gastrulation）阶段的形态发生事件，对应胚胎着床的关键发育窗口期。
赛业OriCell®长期致力于干细胞领域的研究，在干细胞的诱导分化中有专业的技术及丰富经验，依赖于成熟的干细胞技术平台，我们可以为您开展多种干细胞分化潜能研究的实验服务。
如何制备获得大小均一、状态稳定的EB？以下为大家介绍一种赛业OriCell®对ESC拟胚体制备的实验方法。
- 原代细胞：OriCell®小鼠胚胎干细胞
- 诱导试剂盒：OriCell®拟胚体（EB）形成试剂盒（货号MUXES-90051）（试剂盒配置方法及诱导步骤请详见产品说明书）
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多能性退出阶段：通过撤除LIF因子或滋养层细胞支持，解除干细胞多能性维持信号。
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细胞自组织过程：E-cadherin介导的细胞黏附作用在重力影响下形成球状聚集体。
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三维信号网络建立：BMP/Wnt等形态发生素形成内源性浓度梯度，模拟胚胎轴向分化微环境。
- 培养皿预处理： 使用0.1%明胶溶液完全覆盖培养底面；静置包被30min后吸除，超净台风干30min（注意消除气泡）。
- 细胞准备：消化对数生长期ESC至单细胞悬液；采用差速贴壁法（250×g 4min离心后，37℃贴壁40min）去除MEF滋养层细胞。
- 悬浮培养：调整细胞密度至5.5×104 cells/mL；接种于非TC处理的60mm培养皿；48h后观察直径50-100μm的透亮EB形成。
- 培养维持：采用梯度离心法（180×g 1min离心）或自然沉降进行换液；每72h更换新鲜培养基防止中心坏死。
分化启动：选择培养5天、直径200-300μm的EB；180×g离心后以8-12个EB/孔密度接种24孔板。
表型监测：
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使用EB专用分化培养基；
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培养14天期间每72h换液；
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第5-7天起观察自发搏动现象（＞30次/min为功能成熟标志）。
划重点
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质量控制：需通过重复贴壁步骤，确保干细胞纯度＞95% 。
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消化控制：采用拟胚体形成培养基终止消化，避免细胞损伤。
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尺寸控制：定期分离过大的EB聚集体（＞400μm易导致中心坏死）。
诱导过程效果图
悬浮培养2D
悬浮培养5D
贴壁诱导8D
贴壁诱导10D
贴壁诱导12D
贴壁诱导13D
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产品名称 |
货号 |
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MUBES-01001 |
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MUAES-01001 |
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MUCES-01001 |
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OriCell®血清型小鼠胚胎干细胞完全培养基（通用） |
MUXES-90011 |
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OriCell®小鼠胚胎干细胞无血清培养基Ⅰ型（有饲养层） |
MUXES-90062 |
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OriCell®小鼠胚胎干细胞无血清培养基Ⅱ型（无饲养层） |
MUXES-90061 |
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OriCell®拟胚体（EB）形成试剂盒 |
MUXES-90051 |
上述好物现货供应，文末更有细胞试剂开学大促。
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