干细胞技术养成系列丨胚胎干细胞(ESC)拟胚体标准化诱导YYDS!
胚胎干细胞(Embryonic Stem Cell, ESC)是指从囊胚期的内细胞团中分离出来的,能在体外培养、具有发育全能性的干细胞,可自发分化为各种类型的细胞。在体外特定悬浮培养体系中,ESC可自发形成三维拟胚体(Embryoid Body, EB)。该结构包含内、中、外三个胚层组织,其发育过程精确模拟了哺乳动物胚胎从原肠运动前(Pre-gastrulation)至早期原肠运动(Early gastrulation)阶段的形态发生事件,对应胚胎着床的关键发育窗口期。
赛业OriCell®长期致力于干细胞领域的研究,在干细胞的诱导分化中有专业的技术及丰富经验,依赖于成熟的干细胞技术平台,我们可以为您开展多种干细胞分化潜能研究的实验服务。
如何制备获得大小均一、状态稳定的EB?以下为大家介绍一种赛业OriCell®对ESC拟胚体制备的实验方法。
- 原代细胞:OriCell®小鼠胚胎干细胞
- 诱导试剂盒:OriCell®拟胚体(EB)形成试剂盒(货号MUXES-90051)(试剂盒配置方法及诱导步骤请详见产品说明书)
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多能性退出阶段:通过撤除LIF因子或滋养层细胞支持,解除干细胞多能性维持信号。
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细胞自组织过程:E-cadherin介导的细胞黏附作用在重力影响下形成球状聚集体。
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三维信号网络建立:BMP/Wnt等形态发生素形成内源性浓度梯度,模拟胚胎轴向分化微环境。
细胞准备:消化对数生长期ESC至单细胞悬液;采用差速贴壁法(250×g 4min离心后,37℃贴壁40min)去除MEF滋养层细胞。
悬浮培养:调整细胞密度至5.5×104 cells/mL;接种于非TC处理的60mm培养皿;48h后观察直径50-100μm的透亮EB形成。
培养维持:采用梯度离心法(180×g 1min离心)或自然沉降进行换液;每72h更换新鲜培养基防止中心坏死。
分化启动:选择培养5天、直径200-300μm的EB;180×g离心后以8-12个EB/孔密度接种24孔板。
表型监测:
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使用EB专用分化培养基;
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培养14天期间每72h换液;
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第5-7天起观察自发搏动现象(>30次/min为功能成熟标志)。
划重点
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质量控制:需通过重复贴壁步骤,确保干细胞纯度>95% 。
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消化控制:采用拟胚体形成培养基终止消化,避免细胞损伤。
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尺寸控制:定期分离过大的EB聚集体(>400μm易导致中心坏死)。
诱导过程效果图


悬浮培养2D

悬浮培养5D

贴壁诱导8D

贴壁诱导10D

贴壁诱导12D

贴壁诱导13D
产品名称 |
货号 |
OriCell®C57BL/6小鼠胚胎干细胞 |
MUBES-01001 |
OriCell®129小鼠胚胎干细胞 |
MUAES-01001 |
OriCell®Balb/c小鼠胚胎干细胞 |
MUCES-01001 |
OriCell®血清型小鼠胚胎干细胞完全培养基(通用) |
MUXES-90011 |
OriCell®小鼠胚胎干细胞无血清培养基Ⅰ型(有饲养层) |
MUXES-90062 |
OriCell®小鼠胚胎干细胞无血清培养基Ⅱ型(无饲养层) |
MUXES-90061 |
OriCell®拟胚体(EB)形成试剂盒 |
MUXES-90051 |
上述好物现货供应,文末更有细胞试剂开学大促。
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