② 75％酒精擦拭细胞瓶表面并镜下观察细胞情况。

③ 若一切正常，将细胞培养瓶放入CO₂培养箱内，静置至少2h，使运输过程中震动脱落的细胞重新贴壁。

④ 弃去多余的培养基，1个T25培养瓶中保留10mL培养基即可。

⑤ 将细胞放入37℃、5%CO₂、饱和湿度的CO₂培养箱中培养至传代。

常见问题及解决方案

01 细胞到货后出现「漂、聚团」的原因及解决方案？

客户案例：HEK 293T

① 运输应激：正常贴壁细胞或部分贴壁松散的细胞在运输过程中会因颠簸、温度波动等产生应激反应，从而出现漂浮、聚团且不贴壁的现象。

② 细胞密度不当：在运输过程中细胞代谢产物积累过多，影响细胞微环境，导致细胞状态变差，贴壁能力下降。若细胞密度过低，细胞之间缺乏足够的信号交流，也不利于贴壁。

解决方案：

客户案例：NCM460

原因：

① 运输机械损伤：运输中剧烈震荡可能导致细胞膜受损，细胞内结构被破坏，进而出现空泡化和碎片增多的现象。

② 温度失控：细胞到货后无法及时接收、处理，室外储存的时间过长，细胞的活力会逐渐下降。

③ 代谢应激：打破代谢平衡、干扰细胞信号通路等，引发细胞凋亡或坏死，导致细胞状态变差。

解决方案：

① 评估细胞情况：收货后立即在显微镜下仔细观察细胞的形态、空泡化程度以及碎片比例，拍摄照片记录细胞状态。

② 尝试细胞修复：对于受损但仍有一定活力的细胞，可先正常培养，在培养初期尽量减少对细胞的操作，避免过度扰动细胞，让细胞恢复。若经过一段时间培养后，细胞状态仍无明显改善，应及时与细胞供应商沟通，说明情况并协商解决方案。

③ 优化培养条件：为细胞提供适宜的培养环境，调整培养基的成分，建议使用配套完全培养基，有助于细胞恢复活力、状态。

④ 确保培养箱的温度、湿度和二氧化碳浓度准确稳定：减少环境因素对细胞的进一步刺激。

03 细胞到货后「背景脏，有小黑点」，怀疑污染？

原因：非污染性

细胞有黑点、碎片

细菌污染（图源网络）

真菌污染（图源网络）

解决方案：