细胞培养中,如何正确使用抗生素?
对抗细胞污染,相信大多数实验猿都将希望寄托在抗生素身上,因为抗生素兼具了成本低廉、易操作、可控制等优点,已被证实是最可靠、有效的方法之一。
但是,抗生素有必要使用吗?为什么加了双抗,细胞还是会污染?
认识抗生素
类型
细胞培养常用的抗生素有青霉素、链霉素、庆大霉素、卡那霉素、四环素和红霉素等。我们熟知的双抗,即青霉素、链霉素混合溶液,常配制成100倍或200倍使用。
针对性
抗生素也有适应症,有些抗生素抗菌谱广,但抗菌效力差(如四环素类);有些抗菌谱窄,但抗菌效力强(如青霉素)。双抗主要针对革兰阳性菌、阴性菌有效。必须先明确是由哪种细菌引起的污染,然后再针对性选择能对抗此类细菌的抗生素,这样才能做到有效。
浓度
抗生素浓度过低,则抑菌效果不佳,且耗时过长;浓度过高,虽然可杀死部分细菌,但会对细胞造成损伤。
配伍
单一抗生素往往难以奏效,一般需要多种抗生素联合使用。
存放
双抗需放-20℃避光保存,过期的试剂可能严重影响使用效果。
细胞污染了,再加抗生素不就晚了吗?
1.日常培养中加入抗生素能在一定程度上抑制细菌的发生,但不排除会掩盖其他隐性污染,且不能百分百杜绝污染。
2.为了防止污染物继续扩散,最好的处理方式是丢弃!除非是有特别价值的细胞值得“抢救”,可尝试加大抗生素浓度,用大量PBS清洗去除微生物。
3.已发生微生物污染后即使再使用抗生素也常常难以根除。
4.抗生素对培养细胞的形态和性状都有一定的影响。如果处理不好也有可能造成细胞的死亡。
5.反复使用抗生素会使微生物产生耐药性,且增加下游纯化难度。
CAUTION!
由此得知,使用抗生素也并非一劳永逸,它既可是细胞培养的得力助手,也可能助长了潜在威胁。所以,为了避免影响最终的实验结果,不鼓励在常规的细胞培养中使用抗生素,并且在原代细胞培养中必须严格限制抗生素的使用。况且,不是所有的细胞污染都能用抗生素解决,只有找对污染的原因和类型,“对症下药”才是关键。
如何有效预防细胞污染?
首先,我们通过了解细胞污染的原因及采取相应的预防措施,将受污染的可能性降至最低。
引起细胞污染的原因很多:
细胞房消毒不严;
培养器皿清洗不彻底;
实验人员未有严格遵守无菌操作;
培养基、血清、消化液配置过程再度污染;
细胞组织本身带有污染......
如何打好细胞污染防治攻坚战?赛业云课堂带你精准施策:
重新理解污染
盘点常见的污染类型
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污染物检测方法
污染物的处理和预防
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总的来说,预防细胞污染应注意无菌操作,从源头上排除污染比较好。严格的无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好的细胞来源和培养基配制是减低污染的最好方法。
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