赛业云课堂“你好，所有的干细胞”系列课程之“年轻宝藏的脂肪间充质干细胞——ADSCs”顺利结束，期间我们收到了大家对ADSCs培养的许多疑惑，由于课程时间有限，很多内容来不及一一详细解答，接下来我们将整理成干货总结和热点问题答疑，帮助大家学得会，用的对。

1、脂肪间充质干细胞和SVF的区别，以及之间的联系？

SVF （Stromal Vascular Fraction） ，血管基质成分，是脂肪组织中大部分固形物的集合，其中含有ADSC、内皮细胞、免疫细胞、生长因子等。SVF具有增加组织的修复能力和创面愈合能力，各种细胞之间协同效率高，相比较其他治疗并发症很少。目前SVF在自体脂肪移植美容、骨关节和软组织损伤修复上的研究成果较多。

而ADSC纯度更高，培养周期更长，临床用途也较SVF更广泛。如ADSC和SVF都可以用于膝关节的治疗，且有不错的治疗效果。

2、如何选择供体？

根据实验需求，决定使用供体；根据供体特征，设计实验方案。

一般我们选择：

• 大鼠：出生7~10天乳鼠；取材部位：腹股沟、肩胛皮下，腹腔内。
• 小鼠：2周龄小鼠；取材部位：腹股沟、肩胛皮下，腹腔内；多只混合。

3、取材注意事项有哪些？

• 原代组织取材尽可能完整，保持组织形态；
• 其他结缔组织、血管、淋巴管、基质等在体视镜下剔除干净，避免污染；
• 组织剪碎至糜状，剪碎过程中不可研磨，以免破坏细胞，组织尽可能剪碎；
• 处理组织时要尽可能快，提供比较合适的体外环境，因此用完全培养基配制胶原酶；
• 用酶把组织尽可能消化散，脂肪组织密度比水低会漂浮在上面，不能消化完全，因此需要一边消化一边摇；消化后发现还有组织块未完全消化完，可拿出来用1mL移液枪吹散，把组织块外面松散的部分吹散，使胶原酶尽可能接触未消化的部分，之后继续放水浴锅消化直至离心管中没有肉眼可见的组织块；
• 消化完后的组织在离心前把离心机预冷，使细胞更好的与油脂分离；
• 离心后将油脂去掉，再把沉淀转移至另外一个离心管，混匀，加入适量DNA酶反应一分钟可以把胶状物打散，使细胞更好的脱离下来。

4、细胞接种后首次观察应该注意什么？

接种细胞放培养箱后，一般接种48h可进行首次观察。若时间太短，不利于细胞贴壁；时间太久，则细胞易长满、老化等。观察时动作需要轻柔，减少环境波动。

5、细胞聚团原因?

本身组织不能完全消化，不能完全避免；

很多细胞因子生长过程中会趋于聚团，即使没有组织块也会自己聚团长成克隆团的样子；

细胞长满了才传代：传代时从胰酶加入到终止不要超过2min，正常情况下我们消化30s或1min后看到细胞基本上缩圆了，再轻拍培养瓶侧面，细胞即呈沙状消化下来；如果细胞长满了才传代，胰酶未渗透进去，细胞就会呈一片一片的消化下来，后面也难以吹散，因此会影响到下一代细胞也会成团生长（传代时可把克隆团去除掉）。

6、什么时候换液？

细胞本身需要代谢，培养基中的成分含量会减少，因此48h细胞贴壁后给细胞全量换液，动作要轻柔，换液时间不可过长。

课程回放
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课程大纲：

• ADSCs的起源；
• ADSCs分离培养有哪些关键技术方法？
• ADSCs常见应用案例分析。