【课程回顾】肥而不腻,年轻宝藏,ADSCs爱对了
赛业云课堂“你好,所有的干细胞”系列课程之“年轻宝藏的脂肪间充质干细胞——ADSCs”顺利结束,期间我们收到了大家对ADSCs培养的许多疑惑,由于课程时间有限,很多内容来不及一一详细解答,接下来我们将整理成干货总结和热点问题答疑,帮助大家学得会,用的对。
1、脂肪间充质干细胞和SVF的区别,以及之间的联系?
SVF (Stromal Vascular Fraction) ,血管基质成分,是脂肪组织中大部分固形物的集合,其中含有ADSC、内皮细胞、免疫细胞、生长因子等。SVF具有增加组织的修复能力和创面愈合能力,各种细胞之间协同效率高,相比较其他治疗并发症很少。目前SVF在自体脂肪移植美容、骨关节和软组织损伤修复上的研究成果较多。
而ADSC纯度更高,培养周期更长,临床用途也较SVF更广泛。如ADSC和SVF都可以用于膝关节的治疗,且有不错的治疗效果。
2、如何选择供体?
根据实验需求,决定使用供体;根据供体特征,设计实验方案。
一般我们选择:
- 大鼠:出生7~10天乳鼠;取材部位:腹股沟、肩胛皮下,腹腔内。
- 小鼠:2周龄小鼠;取材部位:腹股沟、肩胛皮下,腹腔内;多只混合。
3、取材注意事项有哪些?
- 原代组织取材尽可能完整,保持组织形态;
- 其他结缔组织、血管、淋巴管、基质等在体视镜下剔除干净,避免污染;
- 组织剪碎至糜状,剪碎过程中不可研磨,以免破坏细胞,组织尽可能剪碎;
- 处理组织时要尽可能快,提供比较合适的体外环境,因此用完全培养基配制胶原酶;
- 用酶把组织尽可能消化散,脂肪组织密度比水低会漂浮在上面,不能消化完全,因此需要一边消化一边摇;消化后发现还有组织块未完全消化完,可拿出来用1mL移液枪吹散,把组织块外面松散的部分吹散,使胶原酶尽可能接触未消化的部分,之后继续放水浴锅消化直至离心管中没有肉眼可见的组织块;
- 消化完后的组织在离心前把离心机预冷,使细胞更好的与油脂分离;
- 离心后将油脂去掉,再把沉淀转移至另外一个离心管,混匀,加入适量DNA酶反应一分钟可以把胶状物打散,使细胞更好的脱离下来。
4、细胞接种后首次观察应该注意什么?
接种细胞放培养箱后,一般接种48h可进行首次观察。若时间太短,不利于细胞贴壁;时间太久,则细胞易长满、老化等。观察时动作需要轻柔,减少环境波动。
5、细胞聚团原因?
本身组织不能完全消化,不能完全避免;
很多细胞因子生长过程中会趋于聚团,即使没有组织块也会自己聚团长成克隆团的样子;
细胞长满了才传代:传代时从胰酶加入到终止不要超过2min,正常情况下我们消化30s或1min后看到细胞基本上缩圆了,再轻拍培养瓶侧面,细胞即呈沙状消化下来;如果细胞长满了才传代,胰酶未渗透进去,细胞就会呈一片一片的消化下来,后面也难以吹散,因此会影响到下一代细胞也会成团生长(传代时可把克隆团去除掉)。
6、什么时候换液?
细胞本身需要代谢,培养基中的成分含量会减少,因此48h细胞贴壁后给细胞全量换液,动作要轻柔,换液时间不可过长。
课程回放
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课程大纲:
- ADSCs的起源;
- ADSCs分离培养有哪些关键技术方法?
- ADSCs常见应用案例分析。
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