✅ 尽量使用低代次细胞进行实验；

✅接种浓度：建议2.5~4×10⁴个活细胞/cm²；

✅ 消化时在显微镜下看到大部分细胞变圆变亮，轻轻拍打培养瓶两侧可见大部分细胞脱落，此时立即终止消化；

✅ 定期做支原体检测，排除支原体污染。

✅ 定时维护CO₂培养箱；

✅ 实验操作过程中轻柔，不可用力过大，以免使细胞受到机械损伤；

✅ 正确配制培养液，定时更换新鲜培养液；

✅ 注意无菌操作。

其实只要把握好幅度和力度，前后、左右交替摇三四次就已经足够了，不论孔板、皿或者培养瓶。对于孔板这样的较小的容器，实际每孔加的培养基总量不会超过2mL，不如直接用合适的移液枪在孔板内吹打之后放平，更能获得良好的效果。

✅ 缓慢冷冻；

✅ 细胞应在生长良好、致密度约为 80-90％、活力达90%以上的状态下冻存；

✅ 冻存时细胞密度少于5×10⁵个活细胞/mL时，很难成功复苏；

✅ 冻存管的盖子一定要拧紧，否则水浴复苏时水会渗入造成污染；

✅ 细胞不可长期保存在-80℃冰箱中。我们建议在-80℃冰箱中的保存时间不要超过48h。

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