Cyagen Oricell

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        • OriCell®Caco-2人结直肠腺癌细胞系
        • OriCell®T84 人结肠腺癌肺转移细胞系
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        • OriCell®LS 174T人结肠腺癌细胞系
        • OriCell®HCT-8人回盲肠癌细胞系
        • OriCell®KYSE-150人食管鳞癌细胞系
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        • OriCell®H-4-II-E大鼠肝细胞系
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        • OriCell®IPEC-J2猪小肠上皮细胞系
      • ● 循环(心血管)系统
        • OriCell®NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者自然杀伤细胞系
        • OriCell®U266B1人外周淋巴细胞系
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        • OriCell®K-562人慢性髓系白血病细胞系
        • OriCell®CCRF-CEM人急性淋巴细胞白血病T淋巴细胞系
        • OriCell®Reh人急性非B非T淋巴细胞白血病系
        • OriCell®HuT78人T淋巴细胞白血病细胞系
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        • OriCell®THP-1人单核细胞白血病细胞系
        • OriCell®Nalm-6成人B型急性淋巴细胞白血病细胞系
        • OriCell®H9人T淋巴细胞系
        • OriCell®RAW264.7小鼠单核细胞白血病细胞系
        • OriCell®Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞系
        • OriCell®MC3T3-E1 Subclone 14 小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14细胞系
        • OriCell®H9c2(2-1) 大鼠心肌细胞系
      • ● 呼吸系统
        • OriCell®BEAS-2B 人正常肺上皮细胞系
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        • OriCell®NCI-H23人非小细胞肺癌细胞系
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        • OriCell®NCI-H226人肺鳞癌细胞系
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        • OriCell®KLN 205小鼠肺鳞癌细胞系
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        • OriCell®V79仓鼠肺细胞系
      • ● 生殖系统
        • OriCell®CHO-K1仓鼠卵巢细胞亚株系
        • OriCell®C-33 A人宫颈癌细胞系
        • OriCell®Hela人宫颈癌细胞系
        • OriCell®LNCaP Clone FGC 人前列腺癌细胞系
        • OriCell®PC-3 人前列腺癌细胞系
        • OriCell®SK-OV-3人卵巢癌细胞系
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        • OriCell®15P-1小鼠睾丸上皮细胞系
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        • OriCell®TM4小鼠睾丸支持细胞系
        • OriCell®RM-1小鼠前列腺癌细胞系
        • OriCell®LLC-WRC 256大鼠腹水癌细胞系
      • ● 泌尿系统
        • OriCell®HK-2人肾近曲小管细胞系
        • OriCell®ACHN人肾腺癌细胞系
        • OriCell®HEK 293人胚肾细胞系
        • OriCell®293-L.P人胚肾细胞系
        • OriCell®786-0人肾细胞腺癌细胞系
        • OriCell®Caki-1人肾透明细胞癌细胞系
        • OriCell®SW-13人肾上腺皮质小细胞癌细胞系
        • OriCell®5637人膀胱癌细胞系
        • OriCell®TCCSUP人膀胱癌细胞系
        • OriCell®T24 人膀胱移行细胞癌细胞系
        • OriCell®HEK-293T(293T)人胚肾细胞系
        • OriCell®HEK 293A人胚肾细胞系
        • OriCell®Renca小鼠肾癌细胞系
        • OriCell®MBT2小鼠膀胱移形癌细胞系
        • OriCell®NRK大鼠肾细胞系
        • OriCell®PC-12大鼠肾上腺啫铬细胞瘤细胞系
        • OriCell®NRK-52E大鼠肾小管上皮细胞
      • ● 神经系统
        • OriCell®SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞系
        • OriCell®SK-N-SH人神经母细胞瘤细胞系
        • OriCell®LN229人胶质瘤细胞系
        • OriCell®U251人胶质瘤细胞系
        • OriCell®U-87 MG人脑星形胶质母细胞瘤细胞系
        • OriCell®ARPE-19人视网膜色素上皮细胞系
        • OriCell®BeWo人绒毛膜肿瘤细胞系
        • OriCell®T98G人脑胶质瘤细胞系
        • OriCell®Neuro-2a小鼠神经母细胞瘤细胞系
        • OriCell®HT-22 小鼠海马神经元细胞系
        • OriCell®GL261 小鼠神经胶质瘤细胞系
        • OriCell®HEI-OC1小鼠耳蜗毛细胞系
        • OriCell®BEND.3小鼠脑微血管内皮细胞系
        • OriCell®C6大鼠胶质瘤细胞系
      • ● 内分泌系统
        • OriCell®BHK-21仓鼠肾成纤维细胞系
        • OriCell®HPDE6-C7人正常胰腺导管上皮细胞系
        • OriCell®ZR-75-1人乳腺癌细胞系
        • OriCell®MCF-7人乳腺癌细胞系
        • OriCell®MDA-MB-231人乳腺癌细胞系
        • OriCell®T-47D人乳腺管癌细胞系
        • OriCell®SK-BR-3人乳腺腺癌细胞系
        • OriCell®PANC-1人胰腺癌细胞系
        • OriCell®HPAF-II人胰腺癌细胞系
        • OriCell®BxPC-3人原位胰腺腺癌细胞系
        • OriCell®AsPC-1人转移胰腺腺癌细胞系
        • OriCell®FTC-133人滤泡状甲状腺癌细胞系
        • OriCell®CAL-62人甲状腺癌细胞系
        • OriCell®BHT101人甲状腺癌细胞系
        • OriCell®KMH-2人甲状腺癌细胞系
        • OriCell®8305C人甲状腺癌细胞系
        • OriCell®B-CPAP人甲状腺乳头状癌细胞系
        • OriCell®SW579人甲状腺鳞癌细胞系
        • OriCell®TT人甲状腺导管癌细胞系
        • OriCell®AtT-20小鼠垂体瘤细胞系
        • OriCell®4T1小鼠乳腺癌细胞系
        • OriCell®Beta-TC-6小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞系
        • OriCell®Pan02小鼠胰腺癌细胞系
        • OriCell®EMT-6小鼠乳腺癌细胞系
        • OriCell®LLC-MK2恒河猴肾细胞系
        • OriCell®Vero 非洲绿猴肾细胞系
        • OriCell®COS-7非洲绿猴SV40转化的肾细胞系
        • OriCell®PK-15猪肾细胞系
      • ● 免疫系统
        • OriCell®U-937人组织细胞淋巴瘤细胞系
        • OriCell®RAJI人Burkitt's淋巴瘤细胞系
        • OriCell®HMy2.CIR人B淋巴母细胞系
        • OriCell®A375 人恶性黑色素瘤细胞系
        • OriCell®A-431人皮肤鳞癌细胞系
        • OriCell®SK-MEL-28 人皮肤恶性黑色瘤细胞系
        • OriCell®SU-DHL-2人弥漫性组织淋巴瘤细胞系
        • OriCell®A875 人黑色素瘤细胞系
        • OriCell®HaCaT人永生化表皮细胞系
        • OriCell®3T3-L1 小鼠胚胎成纤维细胞(前脂肪细胞)系
        • OriCell®3T3-swiss albino小鼠胚胎成纤维系
        • OriCell®NIH/3T3小鼠胚胎成纤维细胞系
        • OriCell®EL4小鼠淋巴瘤细胞系
        • OriCell®B16小鼠黑色素瘤细胞系
        • OriCell®YUMM1.7 小鼠黑色素瘤细胞系
        • OriCell®B16-F10 小鼠皮肤黑色素瘤细胞系
        • OriCell®P388D1小鼠淋巴样瘤细胞系
        • OriCell®E.G7-OVA小鼠T淋巴瘤细胞系
        • OriCell®Ana-1小鼠巨噬细胞系
        • OriCell®C1498小鼠白血病细胞系
        • OriCell®P815小鼠肥大细胞瘤细胞系
        • OriCell®B16BL6 小鼠黑色素瘤细胞系
      • ● 运动(肌肉)系统
        • OriCell®HT-1080人纤维肉瘤系
        • OriCell®MG-63人骨肉瘤细胞系
        • OriCell®U-2 OS人骨肉瘤细胞系
        • OriCell®RD人恶性胚胎横纹肌瘤细胞系
        • OriCell®Saos-2人成骨肉瘤细胞系
        • OriCell®SW1353人软骨肉瘤细胞系
        • OriCell®A-673人横纹肌肉瘤细胞系
        • OriCell®C2C12小鼠成肌细胞系
        • OriCell®L6大鼠成肌细胞系
    • 荧光细胞系
      • ● 标记的细胞系
        • OriCell®A549 with GFP
        • OriCell®A549 with RFP
        • OriCell®A549 with Luciferase & GFP
        • OriCell®HCT 116 with GFP
        • OriCell®HCT 116 with RFP
        • OriCell®HCT 116 with Luciferase & GFP
        • OriCell®HT-29 with GFP
        • OriCell®HT-29 with RFP
        • OriCell®HT-29 with Luciferase & GFP
        • OriCell®Hep G2 with RFP
        • OriCell®MGC-803 with GFP
        • OriCell®MGC-803 with RFP
        • OriCell®MGC-803 with Luciferase & GFP
        • OriCell®KYSE520 with GFP
        • OriCell®KYSE520 with RFP
        • OriCell®KYSE520 with Luciferase & GFP
        • OriCell®MCF-7 with GFP
        • OriCell®MCF-7 with RFP
        • OriCell®MDA-MB-231 with GFP
        • OriCell®MDA-MB-231 with RFP
        • OriCell®BXPC-3 with GFP
        • OriCell®BXPC-3 with RFP
        • OriCell®BXPC-3 with Luciferase & GFP
        • OriCell®TCCSUP with GFP
        • OriCell®TCCSUP with RFP
        • OriCell®TCCSUP with Luciferase & GFP
        • OriCell®Hela with GFP
        • OriCell®Hela with RFP
        • OriCell®Hela with Luciferase & GFP
        • OriCell®SK-OV-3 with GFP
        • OriCell®SK-OV-3 with RFP
        • OriCell®U251 with GFP
        • OriCell®U251 with RFP
        • OriCell®U251 with Luciferase & GFP
        • OriCell®U-87 MG with GFP
        • OriCell®U-87 MG with RFP
        • OriCell®U-87 MG with Luciferase & GFP
        • OriCell®CT26.WT with GFP
        • OriCell®CT26.WT with RFP
        • OriCell®CT26.WT with Luciferase & GFP
        • OriCell®Hepa 1-6 with GFP
        • OriCell®Hepa 1-6 with RFP
        • OriCell®Hepa 1-6 with Luciferase & GFP
        • OriCell®4T1 with GFP
        • OriCell®4T1 with RFP
        • OriCell®Pan02 with GFP
        • OriCell®Pan02 with RFP
        • OriCell®Pan02 with Luciferase & GFP
        • OriCell®MBT2 with GFP
        • OriCell®MBT2 with RFP
        • OriCell®EMT-6 with GFP
        • OriCell®EMT-6 with RFP
        • OriCell®EMT-6 with Luciferase & GFP
  • 细胞培养试剂
    • 进口牛血清
      • ● OriCell®特级胎牛血清
      • ● OriCell®优级胎牛血清
      • ● OriCell®标准级胎牛血清
      • ● OriCell®去外泌体血清
      • ● OriCell®新生牛血清
      • ● OriCell®成年牛血清
    • 细胞培养基
      • ● 干细胞完全培养基
        • 骨髓间充质干细胞完全培养基
        • 脂肪间充质干细胞完全培养基
        • 胚胎干细胞完全培养基
        • 神经干细胞完全培养基
        • 脐带脐血肌腱干细胞完全培养基
        • 牙髓间充质干细胞完全培养基
        • 内皮细胞完全培养基
        • 神经元完全培养基
        • 星形胶质细胞完全培养基
        • 成纤维细胞完全培养基
      • ● 干细胞诱导分化试剂盒
        • 成骨诱导分化试剂盒
        • 成脂诱导分化试剂盒
        • 成软骨诱导分化试剂盒
        • 拟胚体(EB)形成试剂盒
        • 成神经元诱导分化试剂盒
        • 成星形胶质细胞诱导分化试剂盒
        • 成肝细胞诱导分化试剂盒
      • ● 干细胞无血清培养基
        • OriCell®成人骨髓间充质干细胞完全培养基(无血清Ⅱ型)
        • OriCell®成人脂肪间充质干细胞完全培养基(无血清Ⅱ型)
        • OriCell®人脐带间充质干细胞完全培养基(无血清Ⅱ型)
        • OriCell®人脐血间充质干细胞完全培养基(无血清II型)
        • OriCell®人牙髓间充质干细胞完全培养基(无血清 II 型)
      • ● 干细胞去外泌体完全培养基
        • 骨髓间充质干细胞去外泌体完全培养基
        • 脂肪间充质干细胞去外泌体完全培养基
        • 脐带脐血间充质干细胞去外泌体完全培养基
        • 牙髓间充质干细胞去外泌体完全培养基
      • ● 细胞系完全培养基
        • 消化系统相关培养基
        • 循环(心血管)系统相关培养基
        • 呼吸系统相关培养基
        • 生殖系统相关培养基
        • 泌尿系统相关培养基
        • 神经系统相关培养基
        • 免疫系统相关培养基
        • 内分泌系统相关培养基
    • 细胞培养辅助产品
      • ● 细胞冻存液
        • OriCell®通用无蛋白非程序冻存液
        • OriCell®通用血清型非程序冻存液
        • OriCell®神经干细胞无蛋白非程序冻存液
        • OriCell®神经干细胞无蛋白程序冻存液
      • ● 细胞因子
        • 白介素
        • 生长因子
        • 肿瘤坏死因子
        • 集落刺激因子
        • 干扰素
        • 趋化因子
        • 其它因子
      • ● 干细胞检测试剂盒
        • OriCell®间充质干细胞(人)表面标记检测试剂盒
        • OriCell®间充质干细胞(大鼠)表面标记检测试剂盒
        • OriCell®间充质干细胞(小鼠)表面标记检测试剂盒
      • ● 生长添加物
        • OriCell®NEAA细胞培养添加物(100×)
        • OriCell®ITS细胞培养添加物(100×)
        • OriCell®L-Glutamine (100×)谷氨酰胺添加物
      • ● 染色液
        • OriCell®油红O染色液 (Oil Red O Solultion)
        • OriCell®茜素红染色液 (Alizarin Red S Solution)
        • OriCell®阿利辛蓝染色液 (Alcian Blue 8GX Solultion)
      • ● 抗生素
        • OriCell®青霉素-链霉素溶液(100X)
        • OriCell®青霉素-链霉素-两性霉素B溶液(100X)
        • OriCell®青霉素-链霉素-庆大霉素溶液(100X)
        • OriCell®支原体清除试剂(100X)
      • ● 缓冲液
        • OriCell®PBS缓冲液(1X)
        • OriCell®Hank's Balanced Salt Solution(HBSS)
      • ● 蛋白酶
        • OriCell®胰蛋白酶细胞消化液(0.25%)
        • OriCell®无动物蛋白胰酶替代物
        • OriCell®Collagenase Type I (0.1%) 一型胶原蛋白酶
      • ● 辅剂
        • OriCell®明胶溶液(0.1%)
        • OriCell®Poly-L-lysine 多聚-L-赖氨酸
  • 细胞技术服务
    • 干细胞提取与鉴定服务
    • 干细胞定向诱导分化服务
    • 胎牛血清筛选服务
  • 市场活动
    • 促销活动
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0.1M盐酸溶液可加速促进dECM生物墨水制备

0.1M盐酸溶液可加速促进dECM生物墨水制备 | 赛业OriCell

 

近期,由北京大学第三医院运动医学科领导的研究团队在《Acta Biomaterialia》杂志上发表题为“Comparison of three different acidic solutions in tendon decellularized extracellular matrix bio-ink fabrication for 3D cell printing ”的论文,比较了三种酸性溶液0.5M醋酸(AA)、0.1M盐酸(HA)和0.02M盐酸(HA)在肌腱衍生的脱细胞胞外基质(Decellularized extracellular matrix ,dECM)生物墨水用于3D细胞打印的生物制备中的应用,研究表明0.1M HA能加快dECM粉末的消化速度,使得其制作的dECM水凝胶的刚度降低,变得更柔软,可促进包被细胞的扩散和增殖,表现出更好的肌腱诱导能力。

Acta Biomaterialia

 

dECM水凝胶由于具有良好的细胞相容性和仿生特性,在3D细胞打印生物墨水中的应用日益受到重视。生物墨水的渗透压和刚度是影响打印细胞生物学功能的重要因素,然而对dECM在这方面的关注却很少,这项研究首先比较了三种常用酸性溶液在肌腱dECM水凝胶制备中的消化状况,然后比较了三种肌腱衍生的dECM水凝胶的渗透压和流变特性,再将干细胞与三种肌腱来源的dECM水凝胶结合,用于3D生物打印。

图1. 研究设计示意图

图1. 研究设计示意图

 

3D细胞打印

首先,研究人员制备猪肌腱脱细胞及dECM粉末,之后通过添加3mg/mL胃蛋白酶在0.5M AA,0.1M HA或0.02M HA溶液中酶解制备dECM生物墨水。同时提取鼠骨髓间充质干细胞,并做成骨、成脂、成软骨细胞三系分化鉴定。再将第三代BMSCs的细胞悬液与中和的dECM生物墨水混合,给0.5M AA、0.1M HA和0.02M HA制的生物墨水设定印刷压力,生物打印速度均设定为15毫米/秒。在直径6cm的细胞培养皿上打印层距100μm、20×20mm的三层网格结构。打印的细胞负载结构在37°C和5%的二氧化碳中孵育,并分别于第3、6、9、13天更换培养皿培养液(图2)。本实验中使用的BMSCs三系分化培养基和染色液均购自赛业OriCell®。

图2. 在不同印刷头速度下,每个组的形状保真度值 | 赛业OriCell

图2. 在不同印刷头速度下,每个组的形状保真度值

 

三种生物墨水打印效果比较

研究人员评估了加入培养基前细胞被水凝胶包裹的时间对三种dECM水凝胶细胞活力的影响。0.5M AA组在加入细胞培养基前,随着包封时间的增加,打印细胞的活力明显下降,这可能与它对细胞的渗透压冲击有关;0.1M HA组和0.02M HA组30min内细胞存活率均在90%以上,60min后细胞存活率开始下降。细胞存活率的下降可能与其他更复杂的问题有关,如温度和氧化状态。然而,这两种类型的生物墨水在水凝胶封装120min后,细胞存活率甚至高于75%(图3)。

图3. dECM水凝胶包封时间对细胞存活率的影响 | 赛业OriCell

图3. dECM水凝胶包封时间对细胞存活率的影响

 

其次,研究人员对三种类型的dECM生物墨水在两周内6个时间点的细胞存活率(图4)和细胞增殖(图5)进行了评估和比较,0.5M AA组在第10天,细胞存活率64±5%;0.1M HA组和0.02M HA打印后10天和14天,其中0.1M HA组的打印细胞挤在一起,活率高细胞密度更大。

图4. 三种dECM生物墨水两周内的细胞存活率 | 赛业OriCell

图4. 三种dECM生物墨水两周内的细胞存活率

 

图5. 三种dECM生物墨水打印细胞的增殖试验 | 赛业OriCell

图5. 三种dECM生物墨水打印细胞的增殖试验

 

再次,研究人员对BMSCs在三组生物墨水中扩散进行了对比分析,扩增第14天0.1M HA组的细胞群的扩展长度最大,部分打印细胞的展布长度甚至超过100μm,0.5M AA和0.02M HA组的伸展长度均低于0.1M HA组。另外0.1M HA组打印后4天大幅收缩,打印后25天,打印的组织大约只有原来大小的四分之一,其他两组无收缩现象。这可能是因为0.1M HA组制成的水凝胶刚度很低,另一个原因可能是凝胶速率较低,这导致了胶原纤维网络的不稳定结构(图6)。

图6. 三种dECM生物墨水打印细胞扩散试验 | 赛业OriCell

图6. 三种dECM生物墨水打印细胞扩散试验

图6. 三种dECM生物墨水打印细胞扩散试验

 

最后,研究人员用RT-PCR法从基因水平阐明三种dECM水凝胶对BMSCs成腱分化的影响,0.1M HA制成的dECM生物墨水打印的BMSCs与对照组相比,Scx、Tnc、COL1和Tnmd mRNA表达明显升高。虽然在其他两组中肌腱相关基因的表达也有升高的趋势,但只有一些差异是显著的。可能是因为对照组是商业化的I型胶原生物墨水(来自牛皮组织),具有良好的致健能力(图7)。

图7. 三种类型dECM生物墨水包裹的BMSCs基因表达趋势 | 赛业OriCell

图7. 三种类型dECM生物墨水包裹的BMSCs基因表达趋势

 

结论

0.1M盐酸的低pH值可以加速dECM粉末的消化过程。这可以使dECM水凝胶更加柔软,其存储模量小于100Pa,这种柔软的dECM水凝胶促进了被其包裹的干细胞的扩散和增殖。与其他两种更硬的dECM水凝胶相比,它也表现出更好的肌腱诱导能力。但这种过度消化的dECM水凝胶更不稳定,随着培养时间的延长它会收缩,因此在dECM生物墨水制备过程中,选择合适的酸性溶液类型和浓度是必要的。消化时间、酸性溶液的强度以及dECM粉末的大小和浓度之间应保持平衡。

 

原文检索:

Fengyuan Zhao, Jin Cheng, Jiahao Zhang, Huilei Yu, Wenli Dai, Wenqiang Yan, Muyang Sun, Guocheng Ding, Qi Li, Qingyang Meng, Qiang Liu, Xiaoning Duan, Xiaoqing Hu, Yingfang Ao.Comparison of three different acidic solutions in tendon decellularized extracellular matrix bio-ink fabrication for 3D cell printing.Acta Biomater. 2021 Sep 1;131:262-275. doi: 10.1016/j.actbio.2021.06.026. Epub 2021 Jun 23.

 

赛业OriCell®拥有15年干细胞研究经验,在干细胞的诱导分化中有专业的技术及丰富经验。OriCell®为各种干细胞定制了专门的诱导分化培养基,可用于干细胞成骨、成脂和成软骨的定向分化。每款培养基均经过OriCell®细胞团队十余年以来的筛选和验证,为老师们发表高分文章保驾护航。如需咨询订购,欢迎拨打400-680-8038。

 

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OriCell®是赛业生物旗下致力于干细胞试剂及干细胞技术服务的子品牌,作为拥有15年历史的科研干细胞供应商,自主开发了百余种干细胞产品。OriCell®的原代细胞、胎牛血清、细胞培养基及细胞冻存液已服务数万客户,获得了市场占有率和满意度的双赢,产品已直接应用于包括CNS(Cell, Nature, Science)三大期刊在内的5200余篇学术论文。如有需要,欢迎联系我们咨询。

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