• 由贴壁不紧密的纺锤状细胞以及圆形/立方形细胞形态，转变为大而扁平的不规则多边形或多突触状且贴壁能力显著增强；

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RAW264.7镜下极化后形态

03 RAW264.7如何处理才能减少分化呢？

以下推荐“吹打法”具体操作：

1. 传代时使用吸管或移液管吸弃细胞培养上清，留少许培养上清在细胞培养瓶或皿中，方便吹打即可。（如6cm培养皿加入2~3mL PBS）。

   注意：若镜下观察有大量悬浮细胞存在，需将上清全部收集和吹打后的细胞一起离心，避免损失。

2. 使用1mL一次性枪头或移液管吸取培养上清，直接吹打培养容器底面数次。

   注意：吹打动作不可剧烈，避免产生大量气泡，可能损伤细胞，已分化且吹不下来的细胞果断丢弃。

3. 将细胞悬液转移至15mL离心管中。

4. 用PBS（6cm培养皿加入约3mL，10cm培养皿加入约6mL）洗涤培养容器1次，收集残留细胞。

5. 收集的所有细胞悬液以250×g离心4min。

6. 离心后去除上清。

7. 15mL离心管中加入2mL完全培养基，轻柔吹打细胞沉淀，充分吹散、混匀。

8. 将细胞按(4~6) ×10⁴个活细胞/cm²接种至适宜的培养容器内。

9. 摇匀细胞，放入37℃、5% CO₂、饱和湿度的CO₂培养箱中。

10. 传代次日，观察细胞状态。若发现较多漂浮且状态不佳细胞，应予以换液。

11. 每3天更换一次新鲜的培养基，待细胞汇合度至85%以上，即需传代或冻存。