解密神经宇宙的第一块拼图—星形胶质细胞取材全攻略
星形胶质细胞是存在于大脑以及脊髓中的一种星状的胶质细胞。它们在脑血屏障的形成中起着非常重要的作用,为神经组织提供营养,维持细胞外离子平衡,治疗大脑创伤和脊髓损伤。
皮层星形胶质细胞可被用于神经生物学的研究,比如,中枢神经系统细胞外环境的维护,神经元新陈代谢和神经递质合成的支撑,以及帕金森氏病、阿尔茨海默病方面的新药研发。
赛业OriCell®已构建了品类丰富、数量庞大的细胞现货资源库,其中星形胶质细胞备受关注。赛业云课堂曾开设“摘星”主题课程(文末可查看完整回放),深入讲解相关知识。如今,我们将该文字图文攻略整理分享,重点为大家呈现——如何原代分离提取星形胶质细胞。
科学捕获星星——星形胶质细胞分离提取步骤
OriCell®SD大鼠皮层星形胶质细胞取自新生SD大鼠的大脑皮层。
实验材料:出生1-3d的SD乳鼠。
实验试剂:OriCell®大鼠星形胶质细胞完全培养基、OriCell®PBS缓冲液(1X)、OriCell®青霉素-链霉素溶液(100X)、OriCell®Poly-L-lysine多聚-L-赖氨酸。
实验耗材:10cm培养皿、6cm培养皿、眼科镊(4把)、眼科剪(2把)、显微镊(2把)、显微剪(1把)、1.5mL EP管、15mL离心管、冰盒。
星星采样指南-组织提取示意图:
暴露乳鼠大脑组织

保留大脑皮层组织

将乳鼠大脑取出

剔除脑血管膜、脑干
取材步骤:
1. 处死小鼠,使用75%的酒精浸泡2-3min。
2. 在超净工作台中用眼科镊取出乳鼠,将其置于装有PBS的10cm皿内,使其背部向上。
3. 首先将颈部皮肤剪开,再沿着乳鼠头顶中线剪开,拨开颅骨,将乳鼠大脑取出,置于另一个装有PBS的培养皿中。
4. 在体视镜下,将乳鼠的大脑沿着中线剪开成两半,剥除脑膜,去除脑干,使其中央纵裂面向上,用显微剪(或显微镊)剪下大脑皮层组织,放于提前加好200μL完全培养基的1.5mL EP管中,插至冰上。
5. 用移液枪仔细吹打10次左右,吹打过程中注意不要产生气泡,吹打直至大脑皮层组织解离成单细胞悬液,收集至15mL离心管中。
6. 离心(265×g、4min),弃上清。
7. 用1mL大鼠星形胶质完全培养基重悬细胞。
8. 取少量细胞悬液计数,根据细胞量调整接种密度,接种至铺有Poly-L-lysine的培养皿内。
9. 将细胞置于37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养。
10. 次日观察细胞,是否有较多细胞碎片和死细胞,可以酌情考虑半量换液或全换液。
显微镜下的银河-细胞形态:




细胞检测(OriCell®星形胶质细胞质控要点):
1. 通过细菌、真菌、支原体、内毒素检测。
2. 通过细胞复苏活力检测,复苏存活率>80%。
3. 通过细胞周期检测,倍增周期<72h。
4. 通过免疫荧光检测,表达GFAP(≥80%);不表达β-tubulinIII(≤10%),Galc(≤10%)。
赛业OriCell®星形胶质细胞现货产品
产品名称 |
货号 |
规格 |
OriCell®SD大鼠皮层星形胶质细胞 |
SCCAC-00001 |
1*10^6 |
OriCell®F344大鼠皮层星形胶质细胞 |
FCCAC-00001 |
1*10^6 |
OriCell®Wistar大鼠皮层星形胶质细胞 |
WCCAC-00001 |
1*10^6 |
OriCell®大鼠星形胶质细胞完全培养基 |
RAXAC-90011 |
500mL |
RAXAC-80011 |
200mL |
|
OriCell®小鼠星形胶质细胞完全培养基 |
MUXAC-90011 |
500mL |
MUXAC-80011 |
200mL |
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