间充质干细胞成骨诱导分化原理和核心步骤是什么？
通过体外诱导成骨分化，可以大量生产成骨细胞，其核心目标是模拟体内骨形成的微环境，促进骨基质合成、矿化及骨组织再生，用于骨组织工程和骨骼修复以及治疗骨缺损、骨质疏松等疾病。此外，成骨诱导分化也是研究干细胞功能和鉴定干细胞类型的重要方法。
干细胞诱导分化是赛业OriCell®的明星业务，近二十年来我们的诱导分化试剂盒和技术服务已助力全球众多研究机构。基于成骨诱导分化实验咨询量大，我们特邀请技术专家精心编写了「人源骨髓间充质干细胞成骨诱导分化」实验的超细图文详解，助您一文掌握关键要点。
osteogenic differentiation
以下以人源骨髓间充质干细胞的成骨诱导分化例举：
所需材料：
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原代细胞：OriCell®人骨髓间充质干细胞（货号HUXMA-01001）
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培养基：OriCell®人骨髓间充质干细胞完全培养基（普通型货号HUXMA-90011，即用型货号HUXMA-80011）
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成骨诱导培养基：OriCell®人骨髓间充质干细胞成骨诱导分化试剂盒（货号HUXMA-90021，内含基础培养基+胎牛血清+诱导因子+明胶+茜素红染色液）
细胞包被：用0.1%明胶或多聚赖氨酸溶液包被培养容器，37℃孵育30分钟，增强细胞贴附性。
细胞接种：取对数生长期的人骨髓间充质干细胞制成单细胞悬液，以2×10⁴ cells/cm²的密度接种至包被后的培养器皿，在培养过程中，使用OriCell®人骨髓间充质干细胞完全培养基来维持细胞的生长和增殖。
诱导启动：当培养至70%汇合度左右开始诱导，弃原培养基换OriCell®人骨髓间充质干细胞成骨诱导分化试剂盒进行成骨诱导，每隔3天换液。（试剂盒配置方法及诱导步骤请详见产品说明书）
划重点
- 细胞汇合度过高可能导致脱落，建议早期控制密度；
- 诱导后期，可改为每两天半量换液以减少成骨细胞脱落、钙结节损失；
- 每次换液前需将培养基预热。
染色鉴定：茜素红染色，见红色钙结节，验证矿化能力。
终止诱导与清洗：吸弃成骨诱导培养基，用预冷的1×PBS轻柔清洗细胞2-3次，去除残留培养基。
细胞固定：每孔加入固定液，室温固定30分钟。
染色反应：吸弃固定液，1×PBS清洗2次后，加入茜素红工作液覆盖细胞，室温染色5-10分钟。
终止染色与清洗：吸弃染色液，1×PBS清洗2-3次至无浮色残留，加入1×PBS保持湿润。
染色结果：红色颗粒密集分布则说明矿化程度高，成骨分化成功；反之若无显色或显色少则分化失败。
茜素红染色效果
NOTE 注意事项
1、如何判断可进行茜素红染色？
不能以诱导时间决定染色时间，而务必以镜下可见聚集的钙结节为准。
（我猜你们又要问钙结节长啥样啊？如何与它相认？）
别急，我们也准备了高清大图
3、染色过深怎么办？
缩短染色时间或降低茜素红浓度（如0.1%）。
4、钙结节脱落怎么办？
固定前避免剧烈晃动培养板。
5、细胞状态怎么选？我的细胞为什么诱导不出来？
尽量选用低代次、状态好且活性佳的细胞，提高诱导成功率。
6、茜素红染色效果不好，有可能是什么原因？
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钙结节的量：染色前要确认是否已经诱导成功，建议在镜下能看到大片结节形成时后再行染色。
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染色液的温度：染色液是2-8℃保存的，在使用之前最好恢复至室温。
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染色液作用时间：推荐染色时间是5-10min，如果室内温度较低或者染色液较冷，建议延长染色时间，直到看见明显的染色效果。
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染色液失效：如果长时间都没出现染色效果，可能是因为染色液保存不当或者过期等原因造成。
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